芹菜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

商品屬性

產(chǎn)品概述

本試劑盒采用探針法熒光定量PCR技術(shù)，專用于檢測樣品中芹菜源性成分的核酸，具有高靈敏度和特異性。適用于科研領(lǐng)域，嚴禁用于臨床診斷。

產(chǎn)品組成

| 編號 | 成分 | 規(guī)格 |

| 試劑一 | 探針法qPCR緩沖液 | 500 μL |

| 試劑二 | 探針法qPCR酶混合液 | 50 μL |

| 試劑三 | 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL |

| 試劑四 | PCR引物-探針干粉 | 50 T |

| 試劑五 | PCR陽性對照（10^7拷貝/μL） | 50 μL |

操作步驟

1. 標準曲線樣品制備

標記6支離心管（6至1號），每管加入45 μL模板稀釋液。

依次梯度稀釋陽性對照（10^7拷貝/μL），從6號管（10^6拷貝/μL）至1號管（10^1拷貝/μL），每稀釋一步更換槍頭，震蕩混勻后冰上保存。

2. 樣品DNA制備

建議設(shè)置N+2個提取（含陽性對照PC和陰性對照NC）。

使用兼容的DNA提取試劑盒純化樣本，PC為陽性對照1000倍稀釋液，NC為超純水。

3. qPCR反應體系（20 μL）

| 成分 | 樣品管（N+2） | 陰性對照管 | 標準曲線管（2-7號） |

| qPCR緩沖液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 探針 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 樣品DNA | 5 μL | — | — |

| 標準曲線稀釋液 | — | — | 5 μL |

| 超純水 | — | 5 μL | — |

4. PCR程序

| 步驟 | 溫度 | 時間 |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |

| 預變性 | 94℃ | 10 min |

| 40循環(huán)擴增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |

數(shù)據(jù)分析

定量檢測：以陽性對照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標準曲線，計算樣本濃度。

定性檢測：

陰性對照Ct≥40，陽性對照Ct≤39且呈典型擴增曲線。

樣本Ct≤39為陽性，≥40為陰性；臨界值（39-40）需復測。

注意事項

分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、加樣），避免交叉污染。

使用帶濾芯槍頭，實驗后以10%次氯酸鈉或75%乙醇消毒臺面及移液器。

試劑避光保存，反應液避免氣泡，管蓋需密封。

所有組分均視為污染物，按生物安全規(guī)范處置。

保存與運輸

保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月。

運輸：低溫干冰或冰袋運輸。

聲明：本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷或其他非科研用途。

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