杏仁源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 杏仁源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 | 英文名稱 | Almond-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5321 |
預(yù)期用途
本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，專用于檢測(cè)樣品中杏仁源性成分的DNA，適用于科研實(shí)驗(yàn)，不可用于臨床診斷。
產(chǎn)品規(guī)格與組成
核心組分：
探針?lè)?/span>qPCR緩沖液（500μL）
Taq酶混合液（含逆轉(zhuǎn)錄酶，100μL）
熒光PCR專用模板稀釋液（1mL）
杏仁源性成分特異性引物及探針混合液（引物混合液100μL，探針50μL）
陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL，50μL）
陰性對(duì)照（250μL）
規(guī)格：50次/盒（20μL反應(yīng)體系）。
技術(shù)原理
采用TaqMan探針?lè)ǎ?/span>
探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，通過(guò)Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)。
定量分析：實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中熒光強(qiáng)度變化，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算目標(biāo)DNA拷貝數(shù)。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10^2–10^7拷貝/μL梯度稀釋）
稀釋陽(yáng)性對(duì)照：
取7管，1號(hào)管加90μL稀釋液，其余各加45μL。
從陽(yáng)性對(duì)照（10^8拷貝/μL）取10μL加入1號(hào)管，依次10倍稀釋至6號(hào)管，7號(hào)管為陰性對(duì)照。
保存：分裝后-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
2. 樣品DNA制備
推薦方法：使用配套裂解液或兼容的核酸提取試劑盒，確保DNA純度（A260/A280≈1.8–2.0）。
3. PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 體積（μL） |
| qPCR緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA/標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照 | 5 |
4. 擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄（若需） | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 循環(huán)（40次） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集熒光） |
結(jié)果判讀
標(biāo)準(zhǔn)曲線：以陽(yáng)性對(duì)照log拷貝數(shù)為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)，R2≥0.99。
樣本判定：
陽(yáng)性：Ct值<30，且擴(kuò)增曲線呈S型。
可疑：Ct值30–35，需復(fù)測(cè)。
陰性：Ct值≥35或無(wú)擴(kuò)增。
注意事項(xiàng)
防污染：
分設(shè)試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)。
使用帶濾芯吸頭及專用耗材。
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月（避免反復(fù)凍融>5次）。
適用范圍：僅限科研，不適用于臨床診斷。
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