產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，通過(guò)特異性引物和TaqMan探針實(shí)現(xiàn)對(duì)白附子（Rhizoma typhonii）DNA/RNA的高靈敏、高特異性檢測(cè)。適用于定性或定量分析，線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級(jí)（10^1–10^7拷貝/μL）。
產(chǎn)品名稱 | 白附子探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Rhizoma Typhonii Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR5207 |
試劑盒成分
探針?lè)?/span>qPCR緩沖液（500μL）
qPCR酶混合液（50μL）
熒光PCR模板稀釋液（1mL）
引物-探針干粉（50T）
陽(yáng)性對(duì)照（10^7拷貝/μL，50μL）
生物版本：
qRT-PCR緩沖液（500μL）
酶混合液（100μL）
引物混合液（100μL）
qPCR探針（50μL）
陽(yáng)性對(duì)照（10^8拷貝/μL，50μL）
操作流程
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（6個(gè)10倍梯度稀釋）：
使用陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋至10^1–10^6拷貝/μL或10^2–10^7拷貝/μL，獨(dú)立操作避免污染。
樣本制備：
提取待測(cè)樣本DNA/RNA，推薦配套提取試劑盒，設(shè)置陰性/陽(yáng)性對(duì)照。
qPCR反應(yīng)體系（20μL）：
| 成分 | 樣本管 | 陰性對(duì)照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管 |
| qPCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探針/引物混合液 | 1–2μL | 1–2μL | 1–2μL |
| 模板 | 5μL | — | — |
| 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液/超純水 | — | 5μL | 5μL |
反應(yīng)程序：
逆轉(zhuǎn)錄（50℃ 30min，若檢測(cè)RNA）→ 預(yù)變性（94℃ 10min）→ 40循環(huán)（94℃ 15s，60℃ 1min，采集FAM信號(hào)）。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測(cè)：Ct≤39為陽(yáng)性，≥40為陰性；臨界值（39–40）需復(fù)測(cè)。
注意事項(xiàng)
嚴(yán)格分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增），避免交叉污染。
使用帶濾芯槍頭，反應(yīng)液避光保存，避免氣泡。
實(shí)驗(yàn)后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作臺(tái)。
檢測(cè)局限性：
基因突變或提取效率差異可能導(dǎo)致假陰性；
污染可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。
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