產(chǎn)品概述

本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術(shù)，專用于艾葉（Folium Artemisiae Argyi）的快速、高特異性核酸鑒定。通過優(yōu)化引物和探針設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)定性與定量分析，靈敏度達(dá)1×10^1拷貝/μL，線性范圍覆蓋5個數(shù)量級（10^1–10^6拷貝/μL）。

試劑盒組成

| 成分 | 規(guī)格 | 功能說明 |

| qPCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |

| qPCR酶混合液 | 50μL | 含熱啟動DNA聚合酶及逆轉(zhuǎn)錄酶 |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋及陰性對照制備 |

| 引物-探針干粉 | 50T | 特異性擴(kuò)增艾葉靶序列 |

| 陽性對照（10^7拷貝/μL） | 50μL | 標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建及質(zhì)控 |

操作流程

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

稀釋步驟：以10倍梯度稀釋陽性對照（10^7拷貝/μL）至10^1–10^6拷貝/μL，使用帶芯槍頭避免交叉污染。

注意事項(xiàng)：稀釋操作需在獨(dú)立潔凈區(qū)進(jìn)行，冰上保存?zhèn)溆谩?/span>

2. 樣本DNA提取

推薦使用兼容的DNA提取試劑盒，并設(shè)置陰性對照（NC，超純水）和陽性對照（PC，10^4拷貝/μL稀釋液）。

3. qPCR反應(yīng)設(shè)置（20μL體系）

| 組分 | 樣品管（μL） | 陰性對照（μL） | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管（μL） |

| qPCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 引物-探針混合液 | 3 | 3 | 3 |

| 模板DNA | 5 | — | — |

| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | — | — | 5 |

| 超純水 | — | 5 | — |

反應(yīng)程序：

逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30 min

預(yù)變性：94℃ 10 min

40循環(huán)：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信號）

數(shù)據(jù)分析

定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線（log拷貝數(shù) vs. Ct值）計(jì)算樣本濃度。

定性判定：

陽性：Ct ≤ 36，擴(kuò)增曲線呈S型；

陰性：Ct ≥ 40或無擴(kuò)增；

灰區(qū)（36<Ct<40）：需復(fù)檢確認(rèn)。

注意事項(xiàng)

分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域完成。

污染控制：使用一次性耗材，實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%乙醇清潔臺面。

保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月，避免反復(fù)凍融。

局限性：

結(jié)果受樣本質(zhì)量、提取效率及操作規(guī)范影響；

基因變異可能導(dǎo)致假陰性。

公司正在出售的產(chǎn)品