產品概述

本試劑盒基于探針法熒光定量RT-PCR技術,專用于檢測高致病豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型變異株(HP-PRRSV)的RNA。通過實時監(jiān)測熒光信號,實現對病毒RNA的定性及定量分析,適用于科研用途(不可用于臨床診斷)。
產品名稱 | 高致病豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型變異株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus American Variant Strain Probe-based Real-time RT-PCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR5223 |

技術原理

反轉錄(RT):將病毒RNA反轉錄為cDNA。
擴增(PCR):通過特異性引物擴增目標cDNA片段。
檢測(熒光定量):探針與靶序列結合后釋放熒光信號,隨擴增循環(huán)數增加,熒光強度與起始模板量成正比。
產品特點

即開即用:用戶僅需提供樣本RNA模板。
高靈敏度:引物及探針針對病毒保守區(qū)設計,檢測限達1×102拷貝/μL。
高特異性:不與豬其他病原體RNA發(fā)生交叉反應。
內控對照:含陽性對照(1×10?拷貝/μL無傳染性DNA片段),避免假陰性干擾。
適用范圍:50次20μL體系反應,適用于組織、血液、糞便等樣本。
試劑盒組成

| 成分 | 規(guī)格 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |
| 酶混合液(含逆轉錄酶、Taq酶) | 100 μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| HP-PRRSV引物混合液 | 100 μL |
| HP-PRRSV探針 | 50 μL |
| 陽性對照(1×10?拷貝/μL) | 50 μL |
| 說明書 | 1份 |
儲存與運輸
儲存條件:-20℃避光保存,有效期12個月。
運輸條件:低溫干冰運輸,避免反復凍融。
操作步驟

1. 樣本制備
RNA提?。菏褂眉嫒莸暮怂崽崛≡噭┖刑崛颖綬NA,避免DNA污染。
2. 標準曲線制備(可選)
將陽性對照按10倍梯度稀釋(102~10?拷貝/μL),每個梯度獨立操作以防污染。
3. PCR反應體系配制
按以下比例混合(單次反應):
緩沖液:10 μL
酶混合液:0.5 μL
引物混合液:2 μL
探針:1 μL
模板RNA:2 μL
無核酸酶水:補至20 μL
4. 擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
| 反轉錄 | 50℃ | 15 min | 1 |
| 預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 擴增 | 95℃ 10 sec → 60℃ 30 sec | 40 |
結果判讀
陽性:Ct值≤35,擴增曲線呈S型。
可疑:Ct值35~38,需復檢。
陰性:Ct值≥38或無Ct值。
注意事項

分區(qū)操作:樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行。
防污染:使用帶濾芯槍頭,實驗后以10%次氯酸清潔臺面。
質量控制:每批次實驗需包含陰/陽性對照。
免責聲明
本產品僅限科研使用,不適用于臨床診斷或動物疫病防控。
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關鍵字: 高致病豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型變異株;探針法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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