牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Yak-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5346 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法熒光定量PCR技術(shù)，專門用于檢測牦牛源性成分。產(chǎn)品具有高靈敏度和高特異性，適用于科研領(lǐng)域的定性及定量分析。
試劑盒成分
探針法qRT-PCR緩沖液（500μL）
探針法qRT-PCR酶混合液（50μL）
熒光PCR專用模板稀釋液（1mL）
PCR引物-探針干粉（50T）
PCR陽性對照（10?拷貝/μL，50μL）
操作流程
標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品制備（10倍梯度稀釋）
標(biāo)記6個(gè)離心管（6-1號(hào)）
每管加入45μL專用模板稀釋液
從6號(hào)管開始，依次進(jìn)行10倍梯度稀釋
所有稀釋操作需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染
樣品DNA制備
建議設(shè)置N+2個(gè)提?。ê栃詫φ蘸完幮詫φ眨?/span>
使用兼容的DNA提取方法純化樣品
qPCR反應(yīng)設(shè)置（20μL體系）
探針法qPCR緩沖液：10μL
探針法qPCR酶混合液：2μL
qRT-PCR探針：1μL
qRT-PCR引物混合液：2μL
樣品DNA模板：5μL
PCR反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10min |
| qPCR循環(huán)（40次） | 94℃ | 15s |
| | 60℃ | 1min（采集FAM通道信號(hào)） |
數(shù)據(jù)分析
定量分析
以陽性對照濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
根據(jù)樣品Ct值推算核酸濃度
定性分析
陰性對照Ct≥40
陽性對照Ct≤36-39（視具體產(chǎn)品而定）
樣品Ct≤36-39判為陽性，≥40判為陰性
注意事項(xiàng)
所有操作需嚴(yán)格按照分區(qū)原則進(jìn)行，避免交叉污染
試劑使用前應(yīng)充分混勻并短暫離心
反應(yīng)液需避光保存
實(shí)驗(yàn)需使用一次性耗材和專用工作服
實(shí)驗(yàn)后需對工作臺(tái)和儀器進(jìn)行消毒處理
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷
局限性說明
檢測結(jié)果受樣本采集、處理及保存條件影響
提取過程中的交叉污染可能導(dǎo)致假陽性
病原體基因突變可能導(dǎo)致假陰性
不同提取方法效率差異可能影響結(jié)果
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關(guān)鍵字： 牦牛源性成分;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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