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Anti-His 磁珠

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-K0209

中文名稱(chēng)：Anti-His 磁珠

存儲(chǔ)條件：4°C，2年請(qǐng)勿離心、干燥或冷凍磁珠。

產(chǎn)品活性：MCE Anti-His 磁珠用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 His 標(biāo)簽蛋白的免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)。

生物活性：MCE Anti-His 磁珠由高質(zhì)量的鼠源單克隆 Anti-His 抗體和納米磁珠共價(jià)偶聯(lián)制備，具有較高的 His 標(biāo)簽融合蛋白加載容量 (> 0.5 mg 蛋白/mL)，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 His 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀 (IP) 實(shí)驗(yàn)。 產(chǎn)品特性 內(nèi)容物 高質(zhì)量 Anti-His 單克隆抗體偶聯(lián)磁珠 磁珠直徑 200 nm 載量 > 0.5 mg protein/mL of beads 適用范圍 免疫沉淀 (IP)，免疫共沉淀 (Co-IP)，His-tag 蛋白純化 推薦使用體積 每 500 μL 細(xì)胞裂解液使用 25 μL 磁珠

描述及優(yōu)勢(shì)：

MCE Anti-His 磁珠由高質(zhì)量的鼠源單克隆 Anti-His 抗體和納米磁珠共價(jià)偶聯(lián)制備，具有較高的 His 標(biāo)簽融合蛋白加載容量 (> 0.5 mg 蛋白/mL)，可用于細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物以及體外表達(dá)系統(tǒng)中 His 標(biāo)記蛋白的免疫沉淀 (IP) 實(shí)驗(yàn)。

操作流程：1. 抗原樣品制備根據(jù)不同的樣品選擇合適的處理方法2. 磁珠預(yù)處理混懸 Anti-His 磁珠，取 25 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架上磁性分離，棄上清。重復(fù)以上洗滌步驟 2 次。3. 樣品的結(jié)合在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 細(xì)胞裂解液，充分混懸，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育，室溫孵育 2 小時(shí)或者 4℃ 條件下孵育過(guò)夜。置于磁力架上磁性分離，棄上清。注： 結(jié)合過(guò)程中，磁珠可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)或呈片狀，屬于正?，F(xiàn)象，不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。4. 洗滌在上述分離得到的磁珠中加入 500 μL 洗滌緩沖液，充分混懸磁珠，磁性分離，棄上清。重復(fù)以上洗滌步驟 3 次，直到洗滌后的上清液中 OD280 小于0.05 為止。注： 如上清液的 OD280 大于 0.05，適當(dāng)增加洗滌次數(shù)即可。5. 洗脫本說(shuō)明書(shū)提供三種 Flag 標(biāo)簽蛋白洗脫方案，操作者可以根據(jù)后期檢測(cè)的需要選擇不同的洗脫方案。1) 變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于 SDS-PAGE 檢測(cè)。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 100 μL 的 1× SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻，95°C 加熱 5 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測(cè)。2) 酸性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 100 μL 的洗脫緩沖液 A 混合均勻，室溫孵育 10 分鐘。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，按每 100 μL 洗脫液加入 10-20 μL 中和緩沖液的比例加入中和緩沖液，將洗脫產(chǎn)物 pH 調(diào)節(jié)至中性，樣品用于后期功能分析。3) 競(jìng)爭(zhēng)性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有生物活性，可用于后期功能分析。步驟：分離磁珠，棄上清，向磁珠中加入 3-5 倍磁珠體積的洗脫緩沖液 B 混合均勻，室溫孵育 1 小時(shí)或者 4°C 條件下孵育 1-2 小時(shí)。分離磁珠，收集上清至新的 EP 管，即為目的蛋白，樣品用于后期功能分析。

詳情參考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/anti-his-magnetic-beads.html