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Annexin V-mCherry-SYTOX Green 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-K1077

產(chǎn)品活性：Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可方便、快捷的檢測(cè)細(xì)胞凋亡。經(jīng) Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無(wú)熒光，凋亡細(xì)胞呈紅色熒光，壞死細(xì)胞呈紅色和綠色熒光。

描述及優(yōu)勢(shì)：

MCE Annexin V-mCherry/SYTOX Green 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒采用 mCherry 標(biāo)記的重組人 Annexin V 檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞凋亡早期，PS 會(huì)外翻到細(xì)胞膜外側(cè)。Annexin V（膜聯(lián)蛋白 V）是一種 Ca²⁺ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與 PS 特異性結(jié)合，因此 Annexin V 常作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。Annexin V 經(jīng) mCherry 標(biāo)記后可發(fā)紅色熒光，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。此外，本試劑盒中的SYTOX Green 是一種非細(xì)胞膜滲透性的綠色熒光染料，只能對(duì)死細(xì)胞染色。經(jīng) Annexin V-mCherry 和 SYTOX Green 聯(lián)合染色后，正常細(xì)胞基本無(wú)熒光，凋亡細(xì)胞呈紅色熒光，壞死細(xì)胞呈紅色和綠色熒光。

操作流程：1. 收集 1-5 × 105 個(gè)細(xì)胞。 懸浮細(xì)胞：1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。 貼壁細(xì)胞：小心吸取細(xì)胞培養(yǎng)液保存?zhèn)溆?。加?PBS 洗滌后，加入適量胰酶消化液（盡量不含 EDTA，以免影響 Annexin V 和 PS 的結(jié)合）消化細(xì)胞。加入前面收集的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，1000 g 離心 5 min，棄去上清。加入 1 mL 預(yù)冷的 PBS 輕輕重懸細(xì)胞沉淀，1000 g 離心 5 min，棄去上清，保留細(xì)胞沉淀。 注：胰酶消化液建議不含 EDTA。 2. 加入 195 μL Binding Buffer，輕輕重懸細(xì)胞。 3. 加入 5 μL Annexin V-mCherry，輕輕混勻。 4. 加入 1 μL SYTOX Green，輕輕混勻。 5. 室溫避光孵育 10-20 min。孵育過(guò)程中可輕輕顛倒數(shù)次以加強(qiáng)染色效果。 6. 用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)。 mCherry 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 587 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 610 nm；SYTOX Green-DNA 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 504 nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 523 nm。

詳情參考：http://www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/mce-annexin-v-mcherry-sytox-green-apoptosis-detection-kit.html