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小鼠中性粒細胞陰性分選試劑盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K0350

存儲條件：4℃，2 年 磁珠禁止凍結(jié)

產(chǎn)品活性：MCE 小鼠中性粒細胞陰性分選試劑盒可從小鼠骨髓或其他組織樣本的單細胞懸液中分離出中性粒細胞。

描述及優(yōu)勢：MCE 小鼠中性粒細胞陰性分選試劑盒可從小鼠骨髓或其他組織樣本的單細胞懸液中分離出中性粒細胞。原理為生物素 (Biotin) 標記的單克隆抗體對非目標細胞（非 CD11b+ Ly-6G+ 細胞）進行標記，再通過鏈霉親和素 (Streptavidin) 標記的磁珠對非目標細胞進行去除，從而達到小鼠中性粒細胞分選的目的。 本試劑盒操作簡單，各成分對細胞均無毒性，且可實現(xiàn)高純度細胞分離的目的，適用于小鼠骨髓、外周血或脾臟中的中性粒細胞分選。分離的細胞可用于下游應(yīng)用，如流式細胞術(shù)、細胞培養(yǎng)、Western blot 分析、免疫沉淀、報告基因檢測或 DNA/RNA 提取等。 MCE 小鼠中性粒細胞陰性分選試劑盒具有如下優(yōu)點： 1. 簡單快速：30 min 即可分選得到目的細胞； 2. 無需分離柱：使用磁性分離器即可實現(xiàn)目的細胞的快速分離； 3. 高純度：分選細胞純度可達 95%； 4. 高活性：分選后細胞活性高且功能良好可用于下游實驗。

操作流程：細胞樣本準備 1. 紅細胞裂解：將獲取的小鼠骨髓、脾臟或外周血樣品置于離心管中，加入紅細胞裂解液（MCE 貨號：HY-K3010）進行紅細胞裂解。 注：a. 建議根據(jù)樣本類型調(diào)整紅細胞裂解液的用量及裂解時間。一般小鼠外周血紅細胞裂解需要更長時間。 b. 少量紅細胞殘留不會影響后續(xù)分選及細胞純度。 c. 小鼠骨髓樣本可省略紅細胞裂解直接進行分選，但分選后由于紅細胞殘留中性粒細胞純度會有所下降 ( 2. 制備單細胞懸液：裂解后用 PBS 重懸細胞，細胞懸液用 70 μm 細胞篩網(wǎng)過濾后，計數(shù)。計數(shù)完成后，500 × g 離心 5 min，棄上清。 注：此步驟目的是除去細胞懸液中的組織和細胞團塊，以免影響后續(xù)細胞分選純度。 3. 用分選緩沖液重懸細胞，調(diào)整細胞密度為 1×108 個/mL. 細胞分選 1. 磁珠準備：充分重懸鏈霉親和素磁珠，取 20 μL 至 1.5 mL EP 管中，加入 1 mL 分選緩沖液，10,000 × g 離心 1 min，棄上清。重復(fù)洗滌磁珠 1 - 2 次，加 20 μL 分選緩沖液重懸磁珠。 注：最后磁珠重懸分選緩沖液的用量與初始吸取磁珠體積需一致。 2. 抗體標記：取 100 μL 細胞懸液 (1 × 107 個細胞）加入流式管底部，再加入 2 μL 生物素化抗體預(yù)混液，混勻后 4°C 孵育 10 min。 注：a. 細胞懸液直接加入流式管底部，避免沿管壁加入。 b. 如果分選更多細胞，可按比例增加生物素化抗體預(yù)混液的用量。 3. 細胞洗滌：細胞-抗體孵育完成后，用分選緩沖液洗滌細胞 1 次，補加分選緩沖液至 1.5 mL，500 g 離心 5min。 注：若處理細胞量較大，可換用 15 mL 離心管，分選緩沖液補加至 5 - 10 mL。 4. 磁珠標記：離心完成后用 100 μL 分選緩沖液重懸細胞，加入 20 μL 清洗過的磁珠，混勻后 4°C 孵育 10 min。 注：如果分選更多細胞，則按比例增加磁珠用量。例如分選 5 × 107 個細胞，在 500 μL 細胞懸液中加入 10 μL 抗體預(yù)混液和 100 μL 磁珠。如果分選少于 1 × 107 個細胞，則將細胞懸液體積補至 100 μL，加入 2 μL 抗體預(yù)混液和 20 μL 磁珠。 5. 洗滌：孵育完成后，在流式管中加入 2.5 mL 分選緩沖液，用移液器輕柔吹吸混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。 6. 分選：將含有細胞的分選流式管置于磁性分離器上，磁性分離 5 min。 7. 收集細胞：將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中（傾倒過程中流式管不可脫離磁性分離器），此細胞懸液中即包含純化的小鼠中性粒細胞，500 × g 離心 5 min。離心后棄上清，收集細胞。 8. 根據(jù)實驗需要洗滌細胞，將細胞重懸于所需緩沖液或培養(yǎng)基中，即可用于后續(xù)分子生物學(xué)或細胞生物學(xué)實驗。

詳情參考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/mouse-neutrophil-negative-selection-kit.html