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HOLO人腫瘤壞死因子-α(TNF-α)檢測試劑盒

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-K2112

產(chǎn)品活性：MCE HOLO 人腫瘤壞死因子-α (TNF-α) 檢測試劑盒是一種基于雙抗體夾心的均相發(fā)光法定量檢測緩沖液、細胞培養(yǎng)上清或血清等生物樣本中人 TNF-α 濃度的試劑盒。

描述及優(yōu)勢：腫瘤壞死因子-α (TNF-α)，又稱癌細胞凝集素和 TNFSF1A，是 TNF 超家族的原型配體。它是一種多效應(yīng)分子，在炎癥、免疫系統(tǒng)發(fā)育、細胞凋亡和脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著核心作用。TNF-α 還與多種病癥有關(guān)，包括哮喘、克羅恩病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)性疼痛、肥胖、2 型糖尿病、膿毒性休克、自身免疫和癌癥等。 MCE HOLO 人腫瘤壞死因子-α (TNF-α) 檢測試劑盒是一種基于雙抗體夾心的均相發(fā)光法定量檢測緩沖液、細胞培養(yǎng)上清或血清等生物樣本中人 TNF-α 濃度的試劑盒。 檢測原理為：將受體微球（TNF-α 特異性抗體 1 交聯(lián)）、TNF-α 特異性抗體 2（生物素標(biāo)記）、待測樣本混合孵育，形成雙抗體夾心的免疫復(fù)合物（抗體 1 - 樣本 - 抗體 2）。免疫復(fù)合物再與供體磁珠（鏈霉親和素交聯(lián)）共孵育形成發(fā)光復(fù)合物，實現(xiàn)兩種微球間距 200 nm 超出單線態(tài)氧的傳遞距離，受體微球均不產(chǎn)生發(fā)射光。 MCE HOLO 人腫瘤壞死因子-α (TNF-α) 檢測試劑盒具有如下特點： 1. 操作簡便：實驗簡單快速，無需清洗、分離操作，匹配自動化儀器； 2. 檢測范圍寬：動態(tài)檢測范圍 0 - 100,000 pg/mL，檢測線性范圍 0.39 - 10,000 pg/mL； 3. 靈敏度高：樣本用量小靈敏度高，特異性強，可實現(xiàn)高通量檢測； 4. 兼容性：適用于細胞培養(yǎng)上清、緩沖液和血清等天然樣本。

操作流程：樣品預(yù)處理 若待測樣本檢測濃度超過試劑盒檢測上限，建議適當(dāng)稀釋后檢測。 1. 細胞培養(yǎng)上清：細胞培養(yǎng)上清液 1,000 × g 離心 10 min，收集上清液。 注：細胞培養(yǎng)液中應(yīng)至少添加 1% FBS 或 0.1% BSA。 注：細胞培養(yǎng)液中應(yīng)至少添加 1% FBS 或 0.1% BSA。 2. 血清：按常規(guī)方案收集血清樣本即可。 注：待測樣本為血清時，建議選擇陰性血清復(fù)溶/稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，其中陰性血清中人 TNF-α 含量應(yīng)低于檢測空白限（空白限濃度見附錄）。 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備 將 TNF-α 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干粉）用 50 μL 去離子水復(fù)溶，配制成 1 μg/mL 的母液，然后用稀釋緩沖液將母液稀釋成系列梯度濃度溶液。 檢測 1. 雙抗體預(yù)混液制備：20 μL A + 20 μL B，混勻待用。 注：建議雙抗體預(yù)混液制備后在 1 h 內(nèi)使用完畢。 2. 免疫復(fù)合物制備：將 10 μL 標(biāo)準(zhǔn)品/待測樣品加入到上述雙抗體預(yù)混液中，混勻。37°C 孵育 15 min 或室溫孵育 60 min。 注：孵育過程建議微孔板蓋蓋或覆膜，防止液體揮發(fā)。 3. 發(fā)光復(fù)合物制備：在綠光或避光環(huán)境下，將 50 μL C. 供體微球（鏈霉親和素交聯(lián)）加入到上述免疫復(fù)合物體系中，37°C 孵育 10 min 或室溫孵育 30 min。 注：a. 前后兩次孵育溫度需保持一致。 b. C. 供體微球（鏈霉親和素交聯(lián)）對光敏感，建議避光（光照度 c. 孵育過程建議微孔板蓋蓋或覆膜，防止液體揮發(fā)。 4. 檢測：將發(fā)光復(fù)合物置于均相化學(xué)發(fā)光儀或含 Alpha 模塊的多功能酶標(biāo)儀中進行儀器讀數(shù) RLU。 5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以 TNF-α 濃度 (pg/mL) 為橫坐標(biāo)，RLU 為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 注：建議每次檢測重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)品每個濃度做 2 - 3 個復(fù)孔。 6. 計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品中 TNF-α 濃度。

詳情參考：www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/holo-human-tumor-necrosis-factor-α-tnf-α-detection-kit.html