神經(jīng)外胚層腫瘤細(xì)胞;TC-71
產(chǎn)品信息：

這是一份關(guān)于人神經(jīng)外胚層腫瘤細(xì)胞（TC-71）的詳細(xì)說明、細(xì)胞特性及標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)操作指南。

TC-71 細(xì)胞是尤文氏肉瘤（Ewing's Sarcoma）/原始神經(jīng)外胚層腫瘤（PNET）研究領(lǐng)域中常用的細(xì)胞系。它具有典型的神經(jīng)外胚層特征，常用于腫瘤機制研究、藥物敏感性測試及細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)研究。

細(xì)胞基本信息

種屬來源：人（Homo sapiens）

組織來源：神經(jīng)外胚層（Neuroectodermal）

疾病特征：尤文氏肉瘤 / 原始神經(jīng)外胚層腫瘤（Ewing's Sarcoma / PNET）

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 雙抗

生物安全等級：BSL-2

細(xì)胞特性與應(yīng)用

特征維度  詳細(xì)描述

背景簡介  TC-71 細(xì)胞于 1983 年建立，常用于尤文氏肉瘤的分子生物學(xué)研究。該細(xì)胞系表達(dá)多種神經(jīng)標(biāo)志物。

免疫特征  表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、CD99（MIC2）等標(biāo)志物。

主要應(yīng)用  1. 骨與軟組織腫瘤研究。

抗腫瘤藥物篩選與藥效評價。

神經(jīng)外胚層分化與凋亡機制研究。

推薦培養(yǎng)體系

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：RPMI-1640

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)（建議使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清以促進(jìn)貼壁和生長）

雙抗添加：1% 青霉素-鏈霉素 (P/S)

培養(yǎng)環(huán)境：

溫度：37℃

氣體環(huán)境：95% 空氣 + 5% CO

濕度：維持培養(yǎng)箱內(nèi)濕度 >90%。

詳細(xì)培養(yǎng)操作指南

1. 細(xì)胞復(fù)蘇 (Thawing)

預(yù)熱：將水浴鍋調(diào)至 37℃，預(yù)熱完全培養(yǎng)基。

解凍：從液氮中取出凍存管，迅速放入 37℃ 水浴中，輕輕搖晃，使其在 1-2 分鐘內(nèi) 快速融化。

轉(zhuǎn)移：用 75% 酒精擦拭凍存管外壁消毒，轉(zhuǎn)入超凈臺。

稀釋：將細(xì)胞懸液緩慢加入含有 4-6 mL 預(yù)熱完全培養(yǎng)基的離心管中（稀釋 DMSO 毒性）。

離心：1000 rpm (約 250g) 離心 3-5 分鐘。

接種：棄上清，加入新鮮完全培養(yǎng)基重懸，接種至 T25 培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代 (Passage)

TC-71 為貼壁細(xì)胞。

觀察：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 80%-90% 時進(jìn)行傳代。

清洗：棄去舊培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的 PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞 1 次。

消化：加入適量消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA），以覆蓋瓶底為宜。

鏡下觀察：置于 37℃ 培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，在顯微鏡下觀察，待細(xì)胞大部分變圓并脫落時，迅速拿回操作臺。

終止：加入含血清的完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打混勻。

離心：1000 rpm 離心 5 分鐘。

重懸與分瓶：棄上清，加入新鮮完全培養(yǎng)基重懸，按 1:2 至 1:3 的比例進(jìn)行分瓶傳代。

細(xì)胞凍存 (Freezing)

狀態(tài)選擇：選擇對數(shù)生長期、活力好、形態(tài)佳的細(xì)胞。

計數(shù)：消化收集細(xì)胞，離心后重懸，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

凍存液：推薦使用 90% 完全培養(yǎng)基 + 10% DMSO，或?qū)Ｓ脽o血清凍存液。

密度：調(diào)整細(xì)胞密度至   cells/mL。

程序降溫：分裝入凍存管，使用程序降溫盒（-80℃ 過夜），然后轉(zhuǎn)入液氮罐長期保存。

關(guān)鍵注意事項

貼壁特性：TC-71 細(xì)胞屬于貼壁細(xì)胞，但在傳代消化時，其貼壁牢固程度適中，需嚴(yán)格控制消化時間，避免消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

運輸脫落：在運輸過程中，部分細(xì)胞可能會從瓶壁脫落。收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)瓶底有漂浮細(xì)胞團(tuán)，屬正常現(xiàn)象。請將瓶內(nèi)液體轉(zhuǎn)移至離心管，離心收集細(xì)胞，棄上清，用 PBS 清洗一次，再用完全培養(yǎng)基重懸后接種回培養(yǎng)瓶中。

支原體檢測：建議定期檢測支原體，確保細(xì)胞無污染。

培養(yǎng)基選擇：雖然 RPMI-1640 是標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，但不同實驗室可根據(jù)具體實驗需求（如血清濃度或添加特定生長因子）進(jìn)行微調(diào)。

STR鑒定：為確保細(xì)胞系的身份純正，防止交叉污染，建議定期進(jìn)行 STR 鑒定。

公司正在出售的產(chǎn)品：

AlphaENOL(Human Alpha-enolase) ELISA Kit 人α烯醇化酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T	Caspase8 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝
phospho-beta Actin (Tyr53) 英文名稱： 0酸化β-肌動蛋白抗體 0.1ml	Anti-Angiotensin II 緊張素Ⅱ抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Hyaluronidase-PH20/Haase 透明質(zhì)酸酶/玻璃酸酶抗體 規(guī)格 0.1ml	Anti-NOS-2/iNOS/FITC 熒光素標(biāo)記合成酶-2抗體(誘導(dǎo)型)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
phospho-ATRIP (Ser68+Ser72) 英文名稱： 0酸化系統(tǒng)性先關(guān)蛋白TREX1抗體 0.1ml	Beta-EPR ELISA Kit 大鼠β內(nèi)啡肽受體
RAB6C 英文名稱： RAS癌基因相關(guān)蛋白Rab6C抗體 0.2ml	ORP150 英文名稱： 氧氣調(diào)節(jié)蛋白150抗體 0.2ml
Anti-CD27/TNFRSF7/FITC 熒光素標(biāo)記CD27抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml	5-HTR2B 英文名稱： 5-羥色胺受體2B抗體 0.1ml
SLCO3A1 英文名稱： 可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白3A1抗體 0.2ml	Acetyl CoA Carboxylase 乙酰輔酶A羧化酶 0.5mg
beta Amyloid 1-28 英文名稱： β淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28抗體 0.1ml	Anti-MTF-1/FITC 熒光素標(biāo)記金屬反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子-1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-CD158a/KIR2DL1 NK細(xì)胞抑制性受體2DL1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml	神經(jīng)外胚層腫瘤細(xì)胞;TC-71CHAC2 英文名稱： 陽離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體 0.1ml
CSN3 英文名稱： κ-酪蛋白抗體 0.1ml	CD200R1L Kit Human 人 CD200RLa / CD200R1L ELISA配對抗體 ELISA

注意事項與應(yīng)用

無菌操作：必須嚴(yán)格無菌無毒，避免微生物污染和不同細(xì)胞間交叉污染。

營養(yǎng)需求：需提供氨基酸、維生素、無機鹽、促生長因子等，動物細(xì)胞還需血清。

抗生素使用：可添加雙抗或三抗預(yù)防污染，但長期培養(yǎng)不建議持續(xù)使用，以防產(chǎn)生耐藥性。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究的基礎(chǔ)工具，可用于細(xì)胞生理代謝、藥物篩選、疫苗生產(chǎn)等研究。不同細(xì)胞系的具體培養(yǎng)條件需參考相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)嶒灲?jīng)驗調(diào)整。