淋巴瘤細(xì)胞+LUC+eGFP;MV4-11-LUC-eGFP-puro
產(chǎn)品信息：

該細(xì)胞系是 MV4-11 細(xì)胞的熒光改造株，穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶（LUC）和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（eGFP），并帶有嘌呤霉素（Puromycin）抗性。它主要用于活體成像（IVIS）、細(xì)胞示蹤及高通量藥物篩選實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞基本信息

親本來(lái)源：MV4-11 (人髓性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

種屬來(lái)源：人（Homo sapiens）

供體信息：10歲男性，急性髓系白血?。p表型B系髓單核細(xì)胞白血?。?/span>

標(biāo)記基因：

LUC：熒光素酶，用于生物發(fā)光成像（需底物熒光素）。

eGFP：增強(qiáng)型綠色熒光蛋白，可直接在熒光顯微鏡下觀察（Ex/Em ～488/507 nm）。

Puro：嘌呤霉素抗性基因，用于篩選和維持質(zhì)粒。

培養(yǎng)基：IMDM + 10% FBS

細(xì)胞特性與應(yīng)用

特征維度  詳細(xì)描述

背景簡(jiǎn)介  通過(guò)慢病毒感染親本 MV4-11 細(xì)胞，篩選得到的穩(wěn)定雙標(biāo)記細(xì)胞系。

熒光特性  細(xì)胞膜/胞漿呈綠色熒光（eGFP），細(xì)胞核通常不發(fā)熒光；活體注射后可通過(guò)尾靜脈注射熒光素底物進(jìn)行 LUC 成像。

抗性維持  培養(yǎng)基中通常需要添加 Puromycin (嘌呤霉素) 以維持熒光標(biāo)記的穩(wěn)定表達(dá)。

主要應(yīng)用  1. 活體示蹤（腫瘤移植瘤模型、轉(zhuǎn)移模型）。

藥物體內(nèi)/體外殺傷活性檢測(cè)（通過(guò)熒光強(qiáng)度或生物發(fā)光強(qiáng)度評(píng)估細(xì)胞活力）。

推薦培養(yǎng)體系

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium)

血清添加：10% 胎牛血清 (FBS)（建議使用優(yōu)質(zhì)進(jìn)口血清，該細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較敏感）

雙抗添加：1% 青霉素-鏈霉素 (P/S)

篩選壓力：Puromycin (嘌呤霉素)（通常添加濃度為 1-2 μg/mL，具體請(qǐng)參考構(gòu)建說(shuō)明書，用于維持質(zhì)粒不丟失）

培養(yǎng)環(huán)境：

溫度：37℃

氣體環(huán)境：95% 空氣 + 5% CO

濕度：維持培養(yǎng)箱內(nèi)濕度 >90%。

詳細(xì)培養(yǎng)操作指南

1. 細(xì)胞復(fù)蘇 (Thawing)

預(yù)熱：37℃ 水浴鍋預(yù)熱完全培養(yǎng)基。

解凍：迅速將凍存管置于 37℃ 水浴中，1-2 分鐘內(nèi)快速搖晃融化。

轉(zhuǎn)移：酒精消毒后轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)，將細(xì)胞懸液緩慢加入含 4-6 mL 預(yù)熱完全培養(yǎng)基的離心管中。

離心：1000 rpm (約 250g) 離心 3-5 分鐘。

接種：棄上清，用完全培養(yǎng)基重懸，接種至 T25 培養(yǎng)瓶中，放入培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代 (Passage)

MV4-11-LUC-eGFP-puro 為懸浮細(xì)胞。

觀察：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 0.8-1.0 × 10 cells/mL 時(shí)進(jìn)行傳代（該細(xì)胞有密度依賴性，密度過(guò)低生長(zhǎng)緩慢）。

收集：直接將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中。

清洗：1000 rpm 離心 5 分鐘，棄上清，用 PBS 重懸洗滌一次（可選，視培養(yǎng)基顏色而定）。

重懸與分瓶：

方法一（直接分瓶）：輕輕吹打混勻后，將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例直接分裝到新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

方法二（離心換液）：離心后棄上清，加入新鮮完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度至 3-5 × 10 cells/mL 接種。

注意事項(xiàng)：該細(xì)胞對(duì)離心力較敏感，常規(guī)擴(kuò)增時(shí)若細(xì)胞狀態(tài)良好，可直接分瓶不離心；若碎片較多，建議低速離心去除碎片。

細(xì)胞凍存 (Freezing)

狀態(tài)選擇：選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、活力好、形態(tài)佳的細(xì)胞。

計(jì)數(shù)：消化收集細(xì)胞（若貼壁不牢可直接收集），離心后重懸。

凍存液：推薦使用 90% 完全培養(yǎng)基 + 10% DMSO，或?qū)Ｓ脽o(wú)血清凍存液。

密度：調(diào)整細(xì)胞密度至  cells/mL。

程序降溫：分裝入凍存管，使用程序降溫盒（-80℃ 過(guò)夜），次日轉(zhuǎn)入液氮罐長(zhǎng)期保存。

關(guān)鍵注意事項(xiàng)

懸浮生長(zhǎng)：該細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中呈懸浮狀態(tài)，呈單個(gè)細(xì)胞或小團(tuán)簇狀。不要使用胰酶消化（除非有特殊貼壁誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)），正常傳代只需吹打混勻即可。

密度依賴：MV4-11 細(xì)胞系具有一定的密度依賴性，傳代后初始密度不宜過(guò)低（建議不低于

否則會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩或死亡。

熒光觀察：在普通倒置顯微鏡下，eGFP 標(biāo)記的細(xì)胞在藍(lán)光激發(fā)下會(huì)發(fā)出明顯的綠色熒光，可用于快速判斷細(xì)胞存活狀態(tài)和標(biāo)記穩(wěn)定性。

抗性維持：為了防止 LUC 和 eGFP 基因丟失，建議在培養(yǎng)基中持續(xù)添加 Puromycin。若用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)接種，需確認(rèn)動(dòng)物體內(nèi)無(wú)抗生素干擾。

運(yùn)輸狀態(tài)：若收到的是懸浮細(xì)胞，直接離心換液即可；若收到凍存管，按復(fù)蘇步驟操作。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Anti-Phospho-MSK1 (Ser376) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml	HSD17B3 英文名稱： 羥類固醇脫氫酶17β3抗體 0.2ml
Anti-TP-1/TEP1 端粒酶相關(guān)蛋白1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml	ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit 人酸性0酸酶Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Phospho-GRB10 (Tyr67) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml	AMA ELISA Kit 大鼠抗心肌抗體
Rhesus antibody Rh HER2/c-erbB2 HER2受體抗體 規(guī)格 0.1ml	BNP(Human brain natriuretic peptide) ELISA Kit 人腦素/腦尿肽
MTSS1 英文名稱： 轉(zhuǎn)移抑制蛋白1 0.1ml	Rhesus antibody Rh DDX19B/DBP5 解旋酶DEAD5抗體 規(guī)格 0.1ml
ADV IgM XI 腺病毒 IgM Ⅺ型(間接法二步法)	Anti-TFR/CD71/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-GIG8/ID2/FITC 熒光素標(biāo)記DNA結(jié)合抑制因子2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml	Rhesus antibody Rh CTRP1/G protein coupled receptor interacting protein 1 G蛋白偶聯(lián)受體相互作用蛋白1抗體(補(bǔ)體Clq TNF相關(guān)蛋白1) 規(guī)格 0.2ml
ADAM9(Human A Disintegrin And Metalloprotease 9) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶9	OxLDL(Human oxidized lowdensity lipoprotein) ELISA Kit 人氧化Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-TETRODOTOXIN ( TTX ) 河素抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml	淋巴瘤細(xì)胞+LUC+eGFP;MV4-11-LUC-eGFP-puroANKK1 英文名稱： 錨定蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白激酶ANKK1抗體 0.2ml
ANNA-1/Hu(Human neuronal nuclear autoantibody) ELISA Kit 人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T	Anti-ICAM-3/CD50 細(xì)胞間粘附分子-3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

注意事項(xiàng)與應(yīng)用

無(wú)菌操作：必須嚴(yán)格無(wú)菌無(wú)毒，避免微生物污染和不同細(xì)胞間交叉污染。

營(yíng)養(yǎng)需求：需提供氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子等，動(dòng)物細(xì)胞還需血清。

抗生素使用：可添加雙抗或三抗預(yù)防污染，但長(zhǎng)期培養(yǎng)不建議持續(xù)使用，以防產(chǎn)生耐藥性。

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)研究的基礎(chǔ)工具，可用于細(xì)胞生理代謝、藥物篩選、疫苗生產(chǎn)等研究。不同細(xì)胞系的具體培養(yǎng)條件需參考相關(guān)文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn)調(diào)整。