檢測目標(biāo)

靶基因：

ureC基因（尿素酶亞基，屬特異性標(biāo)志）

rpoB基因（種水平鑒別，如P. mirabilis vs P. vulgaris）

覆蓋病原種：

臨床常見種：奇異變形桿菌（P. mirabilis）、普通變形桿菌（P. vulgaris）

耐藥株檢測：攜帶blaCTX-M或blaNDM的ESBLs菌株

方法原理

雙重?zé)晒釶CR：

ureC-FAM探針（通用檢測） + rpoB-HEX探針（分型），內(nèi)標(biāo)（Cy5）監(jiān)控全程。

采用抗抑制劑聚合酶，適配尿液、傷口分泌物等高復(fù)雜樣本。

適用樣本

臨床：中段尿（UTI患者）、傷口拭子、血液（敗血癥）

環(huán)境：醫(yī)院污水、導(dǎo)管表面生物膜

二、試劑盒組分與操作

1. 核心組分

組分 功能說明

PCR預(yù)混液 含熱啟動Taq酶、dUTP/UNG防污染系統(tǒng)

探針引物混合液 ureC-FAM/rpoB-HEX探針，內(nèi)標(biāo)（VIC標(biāo)記）

陽性對照 滅活P. mirabilis ATCC 29906株DNA

核酸提取試劑 磁珠法（含尿素酶抑制劑，防假陰性）

2. 操作流程（以尿液樣本為例）

前處理：

5mL尿液離心（10,000g, 10min），沉淀重懸于裂解液。

PCR擴(kuò)增（30μL體系）：

95℃ 5min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）

三、性能與結(jié)果解讀

1. 關(guān)鍵參數(shù)

指標(biāo) 性能要求

靈敏度 102 CFU/mL（直接尿液）

特異性 不與摩根菌、普羅威登斯菌交叉

抗干擾性 耐受5%血紅蛋白或10%尿素

2. 結(jié)果判讀

屬陽性：ureC（FAM）Ct≤35 → 變形桿菌感染。

種鑒別：

rpoB（HEX）Ct≤35 + 熔解峰78℃ → P. mirabilis

rpoB（HEX）Ct≤35 + 熔解峰82℃ → P. vulgaris

四、注意事項(xiàng)

采樣要求

UTI患者晨尿檢出率最高，采樣后2小時(shí)內(nèi)處理（防尿素酶降解RNA）。

耐藥檢測

若臨床疑似ESBLs感染，需補(bǔ)充blaCTX-M檢測模塊。

生物安全

生物膜樣本需超聲破碎后檢測（BSL-2操作）。

五、應(yīng)用場景

臨床診斷：

復(fù)雜性尿路感染（如導(dǎo)管相關(guān)感染）的快速病原確認(rèn)。

院感防控：

手術(shù)器械生物膜污染監(jiān)測。

獸醫(yī)領(lǐng)域：

禽類壞死性腸炎病原篩查。