維生素C含量測(cè)定試劑盒/48 樣

測(cè)定意義：

維生素是人和動(dòng)物為維持正常的生理功能而必須從食物中獲得的一類微量有機(jī)物質(zhì)，在人和動(dòng)物生長(zhǎng)、代謝、發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。維生素大致可分為脂溶性和水溶性兩大類，水溶性維生素主要包括維生素 B1、維生素 B2、維生素 C 等。

維生素 C 即 L-抗壞血酸（AsA），在生物體內(nèi)，維生素 C 是一種抗氧化劑，保護(hù)身體免于自由基的威脅，維生素 C 同時(shí)也是一種輔酶。維生素 C 不穩(wěn)定，在樣品處理和儲(chǔ)存過(guò)程中極易氧化，而高效液相色譜為維生素 C 的測(cè)定提供了簡(jiǎn)單、快速且準(zhǔn)確的方法。

測(cè)定原理：

維生素 C 在 254 nm 下有吸收峰，可以利用高效液相色譜法測(cè)定其含量。

自備儀器和用品：

高效液相色譜儀、低速離心機(jī)、溶劑抽濾裝置、渦旋震蕩器、針頭式過(guò)濾器（水系，50

個(gè)，0.22μm）、濾膜（水系和有機(jī)系各 1 個(gè)，0.45μm）、C18 柱（4.6  ×250  mm）、可調(diào)式移液器、樣品瓶（50 個(gè)，2mL）、內(nèi)襯管（50 個(gè)，放置在樣品瓶?jī)?nèi)用于微量樣品進(jìn)樣）、甲醇（色譜級(jí)，200 mL）、和超純水。

維生素 C 含量測(cè)定操作步驟：

1. 開啟電腦、檢測(cè)器和泵，安裝上色譜柱，打開軟件，在方法組中設(shè)置進(jìn)樣量 10   μL，流速 0.6 mL/min，柱溫 25℃,保留時(shí)間 10min，檢測(cè)波長(zhǎng) 254nm，設(shè)置完畢保存方法組。

2. 用流動(dòng)相過(guò)柱子，待基線穩(wěn)定后開始加樣。

3. 加入標(biāo)準(zhǔn)品 10    μL，在 10min 內(nèi)可分離維生素 C，維生素 C 的保留時(shí)間在 5min 左右，（柱子不同，保留時(shí)間有差異），計(jì)算不同濃度的維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積。

4. 加入樣品 10 μL，在相應(yīng)保留時(shí)間處檢測(cè)維生素 C 的峰面積。

注 意：

1 、維生素 C 不穩(wěn)定，操作過(guò)程應(yīng)注意避光。

2 、為了避免使用過(guò)程中柱壓過(guò)大，流速由小到大調(diào)節(jié)。

3 、使用完畢時(shí)，用 50%的甲醇洗色譜柱 30min。

4、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋倍數(shù)要根據(jù)樣品中維生素 C 濃度確定，樣品中維生素 C 的峰面積必須落在不同濃度的維生素 C 標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積之內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)品稀釋倍數(shù)只是一個(gè)參考。