質(zhì)譜用快速銀染試劑盒/1盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑盒可用于SDS-PAGE、Native-PAGE及2D電泳凝膠上進(jìn)行蛋白銀染，經(jīng)過消除液處理后，去除附著蛋白質(zhì)和膠上的銀粒，再經(jīng)原位酶解、脫鹽等蛋白質(zhì)質(zhì)譜樣品制備步驟后就可以用于質(zhì)譜分析。本試劑盒具有低背景和檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，可在3小時(shí)內(nèi)完成銀染及染色后膠內(nèi)銀粒子的清除。用BCA法蛋白濃度檢測(cè)靈敏度可以達(dá)到0.5 ng，本試劑盒可以染10塊凝膠（6 x 8 cm）。

運(yùn)輸和保存條件：
在常溫下運(yùn)輸，收到后，除顯色液B外其余組分在4。C環(huán)境中保存，保質(zhì)期兩年，顯色液B為交聯(lián)劑，通常在室溫密閉條件下保存180天，若該產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)出現(xiàn)白色絮狀沉淀請(qǐng)暫停使用，并聯(lián)系技術(shù)支持提供幫助。

操作步驟：
1. 取出電泳后的聚丙烯酰胺凝膠，加入20 mL由40%乙醇和10%的乙酸組成的固定液，搖床上振蕩15 min。

2. 傾出固定液，重復(fù)以上步驟2次。

3. 傾出固定液，加入20 mL的1倍體積的敏化液，置于搖床上，振蕩45 min。

4. 傾出敏化液，用雙蒸水振蕩清洗5 min，重復(fù)清洗3次。

5. 傾出雙蒸水，取4 mL的無水乙醇，4 mL的5倍濃度的染色液和12 mL的雙蒸水混合后加入盛膠的器皿中，置于搖床上，振蕩30 min。

6. 傾出染色液，用雙蒸水振蕩清洗30 sec，重復(fù)清洗2次。

7. 傾出雙蒸水，依次加入20 mL的1倍體積的顯色液A和11 μl的顯色液B，置于搖床上，振蕩10 min，搖至蛋白質(zhì)條帶清晰可見。

8. 快速傾出顯色混合液，加入20 mL的1倍體積的終止液，置于搖床上，振蕩15 min。

9. 傾出終止液，用雙蒸水振蕩清洗5 min，重復(fù)清洗3次后觀察顯色條帶。

10. 如后續(xù)質(zhì)譜檢測(cè)需傾出雙蒸水，加入10mL的1倍體積的消除液A和10mL的1倍體積的消除液B的混合液消除凝膠上的銀粒，置于搖床上，振蕩10~60 min。

11. 傾出消除液，用雙蒸水振蕩清洗10 min ，重復(fù)清洗3次后再去打質(zhì)譜。

注意事項(xiàng)：
1. 為防止雜質(zhì)的干擾，操作時(shí)請(qǐng)注意盡量使用高純度的水和潔凈的玻璃器皿。

2. 用水稀釋后的干粉溶液對(duì)光敏感，易見光分解，蒸發(fā)，故請(qǐng)?jiān)诎凳抑腥∮?，并避光保存于冰箱冷藏室中?/span>

3. 過程中所加試劑量是針對(duì)80×60× 1 mm凝膠而定，若體積較大，可適當(dāng)增加各溶液的體積。

4. 若凝膠較厚或操作溫度較低時(shí)，適當(dāng)延長(zhǎng)各步驟所需時(shí)間。實(shí)驗(yàn)前根據(jù)所染膠塊的數(shù)量，取一定體積的需要稀釋的濃縮液，用雙蒸水稀釋為一倍濃度后再使用。

5. 染色及染色后的清洗，顯色和終止的時(shí)間要控制好，否則膠的背景變深，反之銀染靈敏度變低。

6. 顯色液B和消除液A、B有一定的刺激性和毒性，操作時(shí)須在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行，并戴上一次性手套；而且消除液A和B的混合液要現(xiàn)配現(xiàn)用，超過一個(gè)小時(shí)，混合液的顏色就會(huì)由黃綠色變?yōu)闊o色而失效。

7. 加入消除液A和B后，搖床振蕩時(shí)間依據(jù)實(shí)際情況而定，所有銀染條帶消失即止。

8. 顯色液B及干粉有一定的刺激性和毒性，操作時(shí)須在化學(xué)通風(fēng)櫥中進(jìn)行，并做好防護(hù)措施。

9.產(chǎn)品中的保存條件及有效期均以未開封情況下計(jì)算，為了防止產(chǎn)品與空氣接觸發(fā)生化學(xué)反應(yīng)影響產(chǎn)品性能，將未使用完畢的組分按存儲(chǔ)要求保存同時(shí)建議開封后的組分盡快使用完畢。

10. 使用后請(qǐng)旋緊瓶蓋，防止溶液揮發(fā)和與空氣的物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

11. 本試劑只能夠用于體外實(shí)驗(yàn)，不能夠用于臨床、治療和動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等，由此產(chǎn)生的后果，概不承擔(dān)責(zé)任。