鼠呼腸孤病毒3型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 鼠呼腸孤病毒3型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Murine Reovirus Type 3 Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR2652 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒用于鼠呼腸孤病毒3型（Mouse Reovirus Type 3, RV3）的定性及定量檢測(cè)，采用探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)，具有高靈敏度和特異性。適用于科研用途，不可用于臨床診斷。
試劑盒組成
RT-PCR反應(yīng)液：包含逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、dNTPs及優(yōu)化引物探針。
陽性對(duì)照：無傳染性的DNA片段（1×10^7拷貝/μL）。
陰性對(duì)照：無核酸酶水。
熒光PCR專用模板稀釋液。
其他輔助試劑（如適用）。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
樣本要求：需提供提取的病毒RNA模板，建議使用柱式病毒RNA提取試劑盒或兼容的核酸純化方法。
設(shè)備校準(zhǔn)：確保熒光定量PCR儀已校準(zhǔn)，反應(yīng)孔清潔無污染。
分區(qū)操作：核酸提取、試劑配制及擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測(cè)）
稀釋陽性對(duì)照：按6個(gè)10倍梯度稀釋（10^1–10^6拷貝/μL），每步更換槍頭并充分震蕩。
標(biāo)記離心管：依次編號(hào)6至1，加入45 μL稀釋液后，逐級(jí)加入5 μL上一步稀釋液。
保存條件：稀釋后標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
RT-PCR反應(yīng)體系
反應(yīng)體積：20 μL/孔，含模板RNA 2–5 μL。
程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50°C 15分鐘
預(yù)變性：95°C 3分鐘
擴(kuò)增循環(huán)：95°C 15秒 → 60°C 30秒（40循環(huán)，熒光采集）
質(zhì)量控制
陰陽性對(duì)照：每批次實(shí)驗(yàn)需同步檢測(cè)，陽性對(duì)照Ct值≤35且陰性對(duì)照無擴(kuò)增。
重復(fù)性驗(yàn)證：建議臨界值樣品重復(fù)3次，CV≤5%。
結(jié)果判讀
定量分析：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算拷貝數(shù)。
定性分析：Ct值≤38判定為陽性，＞38或無擴(kuò)增為陰性。
注意事項(xiàng)
避免試劑反復(fù)凍融，開封后盡快使用。
操作時(shí)佩戴防護(hù)用具，廢棄物料需按生物安全規(guī)范處理。
若檢測(cè)環(huán)境濕度高，建議使用帶芯槍頭以減少氣溶膠污染。
有效期與儲(chǔ)存
有效期：-20°C避光保存12個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 鼠呼腸孤病毒3型;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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