新型布尼亞病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 新型布尼亞病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Novel Bunyavirus Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR2693 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用染料法熒光定量RT-PCR技術(shù)，針對新型布尼亞病毒（如發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒SFTSV、布尼亞維拉病毒等）的保守基因序列設(shè)計特異性引物及探針，實現(xiàn)對病毒RNA的高靈敏度、高特異性檢測。適用于科研實驗中對可疑樣本的病原學(xué)分析，不用于臨床診斷。
檢驗原理
通過一步法熒光RT-PCR技術(shù)，將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行擴(kuò)增，熒光信號與擴(kuò)增產(chǎn)物同步累積，通過定量分析儀檢測循環(huán)閾值（Ct值），判定樣本中病毒載量。
試劑組成
反應(yīng)液：含緩沖液、dNTPs、熒光染料等（500μL×2管）
酶混合液：逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶（50μL×1管）
陽性質(zhì)控品：已知濃度病毒RNA片段（50μL×1管）
陰性質(zhì)控品：無RNA酶水（250μL×1管）
注：不同批號試劑禁止混用，組分可滿足50次檢測（20μL/反應(yīng)體系）。
儲存及有效期
儲存條件：-20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤5次）。
有效期：12個月（以包裝標(biāo)注為準(zhǔn)）。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
安捷倫MX3000P/3005P
Roche LightCycler
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler系列
樣本要求
樣本類型：動物組織（心、肝、脾等）、全血、血清或病毒培養(yǎng)物。
采集與保存：
組織樣本：2g，-70℃長期保存（≤6個月）；
液體樣本：2mL，短期-20℃保存，運輸需2~8℃冰袋。
預(yù)處理：需按標(biāo)準(zhǔn)方法提取RNA，建議使用商業(yè)RNA提取試劑盒。
操作步驟
試劑準(zhǔn)備：
反應(yīng)液與酶液按比例混合，分裝至PCR管。
陽性對照需梯度稀釋（10^2~10^7拷貝/μL），避免污染。
加樣：每反應(yīng)體系加入5μL模板RNA（或?qū)φ掌罚?/span>
PCR程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)，熒光采集）
結(jié)果判讀
陽性：Ct值≤35，且擴(kuò)增曲線呈S型；
陰性：無Ct值或Ct值＞38；
可疑：35＜Ct值≤38，建議重復(fù)檢測。
注意事項
實驗需在PCR潔凈區(qū)進(jìn)行，嚴(yán)格分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備、樣本處理、擴(kuò)增區(qū)）。
避免試劑反復(fù)凍融，解凍后需徹底混勻并離心。
廢棄物質(zhì)需按生物危害品處理。
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