產(chǎn)品用途
用于定性或定量檢測水泡性口炎病毒新澤西型RNA，適用于臨床樣本、動物組織或培養(yǎng)物的病毒檢測。
產(chǎn)品名稱 | 水泡性口炎病毒新澤西型染料法熒光定量RT-PCR劑盒 | 英文名稱 | Vesicular Stomatitis Virus New Jersey Serotype (VSV-NJ) Dye-Based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3072 |
技術(shù)原理
染料法熒光定量RT-PCR：采用特異性引物擴增VSV-NJ的L基因保守區(qū)，通過熒光染料（如SYBR Green）與雙鏈DNA結(jié)合產(chǎn)生信號，實時監(jiān)測擴增曲線。
高靈敏度與特異性：引物針對VSV-NJ基因高度保守區(qū)域設(shè)計，分析靈敏度可達100拷貝/反應(yīng)，可區(qū)分新澤西型與印第安納型（VSV-IND）。
主要組分
RT-PCR預(yù)混液（含逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、dNTPs等）
特異性引物對
陽性對照（VSV-NJ RNA標準品）
陰性對照（無核酸酶水）
熒光染料
操作步驟
樣本處理：提取待測樣本RNA，建議使用配套RNA提取試劑盒。
反應(yīng)體系配制：按比例混合預(yù)混液、引物、熒光染料及模板RNA。
擴增程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15-30分鐘
預(yù)變性：95℃ 2-5分鐘
循環(huán)階段（40-45輪）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）
結(jié)果分析：
通過閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）定量，標準曲線法計算病毒載量。
定性檢測時，Ct值≤35且擴增曲線呈S型判為陽性。
性能參數(shù)
靈敏度：100拷貝/反應(yīng)
線性范圍：10^1-10^6拷貝/μL（定量檢測）
重復(fù)性：批內(nèi)與批間變異系數(shù)（CV）<5%
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96、LightCycler 480等）。
儲存與運輸
儲存條件：-20℃避光保存，有效期12個月。
運輸條件：低溫干冰運輸。
注意事項
實驗需在無菌環(huán)境下操作，避免RNA降解。
陽性對照需與待測樣本分區(qū)域處理，防止污染。
若需定量，建議每次實驗均運行標準品曲線。
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關(guān)鍵字： 水泡性口炎病毒新澤西型;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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