胰蛋白酶（Trypsin）試劑盒（BAEE法）說(shuō)明書
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈，是一種重要的消化酶。此外，胰蛋白酶還廣泛應(yīng)用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。
測(cè)定原理：
胰蛋白酶能夠催化N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（N-Benzoyl-L-Arginine-Ethylester，BAEE）中酯鍵水解，生成N-苯甲酰-L-精氨酸（N-Benzoyl-L-Arginine，BA），產(chǎn)物在253 nm處具有特征吸收峰，通過(guò)吸光值變化即可表征胰蛋白酶的活性。胰蛋白酶在一定范圍內(nèi)與253nm處吸收值的升高呈良好的線性關(guān)系。
粗酶液提?。?/span>
1、組織樣品：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）冰浴勻漿，15000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測(cè)定步驟：
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到253 nm，使比色池內(nèi)的溫度保持在25.0℃±0.5℃。
2. 工作液的配制：臨用前根據(jù)用量按照試劑一（V）：試劑二（V）=1 mL：9 mL的比例充分混合。未使用完的工作液于4℃保存。
3. 吸取67μl樣本，加入1mL工作液，混勻后立即測(cè)定，在253 nm的波長(zhǎng)處，每隔1分鐘讀取吸光度，共5分鐘。計(jì)算每分鐘△A=A2-A1。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖。
注意：應(yīng)適當(dāng)稀釋或濃縮酶液，使測(cè)定所得吸光度變化曲線線性較高。
胰蛋白酶活性計(jì)算公式：
使用石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25.0℃±0.5℃下，每分鐘內(nèi)降解 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽(BAEE)所需的酶量。
胰蛋白酶（U/mg prot）= △A÷0.009 ÷（Cpr×V1）÷T
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25.0℃±0.5℃下，每分鐘內(nèi)降解 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽(BAEE)所需的酶量。
胰蛋白酶（U/g 鮮重）= △A÷0.009÷（W×V1÷V2）÷T
Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定；W：組織質(zhì)量（g），0.1g；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL），0.067 mL；V2：粗酶液總體積（mL），1 mL；V反總：反應(yīng)總體積，1.067 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），1 min。
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