支鏈/直鏈/總淀粉含量（酶法）-分光法50T

產(chǎn)品簡介：

谷物淀粉中的直鏈淀粉最常見的測定方法是對直鏈淀粉的碘結(jié)合能力進(jìn)行電位法、電流法或比色法測量，從而形成直鏈淀粉-碘包合復(fù)合物。然而，這些方法存在不確定性。支鏈淀粉-碘復(fù)合物也會形成，它們會降低通過非比色法測量的游離碘的濃度，并且可能會在與比色法中的直鏈淀粉-碘復(fù)合物相似的波長處吸收。

本試劑盒利用伴刀豆球蛋白A只與支鏈淀粉結(jié)合而不與直鏈淀粉結(jié)合的特性，使其分離，再用僅水解淀粉的酶復(fù)合物使淀粉水解為葡萄糖，通過檢測葡萄糖含量得到直鏈、支鏈和總淀粉的含量。

保存條件：

未配制前在規(guī)定存儲條件下6個月內(nèi)有效，配制使用后在規(guī)定存儲條件下3個月內(nèi)有效。（各組分詳細(xì)儲存條件見瓶身）

1.所需的儀器和用品：

可見分光光度計、10mm玻璃比色皿、水浴鍋、可調(diào)式移液器、冰、二甲基亞砜（DMSO,分析級）、乙醇、乙酸和蒸餾水

2.需配試劑：

乙酸鈉緩沖液（100mM，pH4.5）：

向900ml蒸餾水中添加5.9ml冰醋酸，通過添加NaOH溶液將pH值調(diào)節(jié)至pH4.5，加入0.2g疊氮化鈉（防腐劑，若沒有該試劑可不添加），調(diào)節(jié)體積至1L。

濃縮ConA溶劑（600mM，pH6.4醋酸鈉緩沖液）：

稱取49.2g無水乙酸鈉，175.5gNaCl，0.5g二水合CaCl2，0.7g六水合MgCl2和0.7g四水合MnCl2，后加入900ml蒸餾水。逐滴加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH至6.4（不能低于6.4，否則重新配置），然后用蒸餾水將其定容至1L。

ConA溶劑（工作濃度）：取30ml濃縮ConA溶劑用蒸餾水將其定容（比例為3：7）至100ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。

淀粉含量測定：

1.準(zhǔn)確稱量淀粉或面粉樣品20±0.2mg，放入10ml離心管中；

2.向離心管中加入1mlDMSO，同時在渦旋儀上低速輕輕攪拌；之后蓋上管子，在100℃沸水浴中加熱，直到樣品完全分散（約1min）；

注意：需確保沒有凝膠狀的淀粉塊存在

3.在渦旋儀上高速攪拌離心管中的內(nèi)容物，并將離心管放入水浴鍋中100℃水浴15min，期間使用渦旋儀混勻3~5次。

4.加熱結(jié)束后立即對樣品進(jìn)行渦旋并加入2ml乙醇（95%(v/v)），繼續(xù)在渦旋儀上持續(xù)攪拌，混合均勻后再加入4ml乙醇（95%(v/v)），蓋上管子并倒置使樣品于液體充分混合15min；

注意：倒置靜置時管中會形成淀粉沉淀，為正常現(xiàn)象

5.將離心管以2,000xg離心5min，棄去上清液，倒置在紙巾上瀝干10min，確保所有的乙醇都已排空，將沉淀用于在隨后的直鏈淀粉和總淀粉測定中。

6.將含有淀粉樣品沉淀的離心管放置在渦旋儀上輕輕渦旋同時加入2mlDMSO并立即渦旋混合，之后將離心管放入水浴鍋中100℃沸水浴15min，并不時攪拌，防止出現(xiàn)凝膠狀的塊狀物；

7.將試管從沸水浴中取出后冷卻至室溫，加入4mlConA溶劑，充分混合，然后將試管內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移（用ConA溶劑反復(fù)洗滌）到25ml容量瓶中，并定容至25ml，即為待測液。注：若是谷物樣本，第6步得到的溶液中有雜質(zhì)，需待自然冷卻5min后于3000rpm室溫（低于10℃會凍結(jié)）離心5min，上清液備用；若是純淀粉樣本，第6步得到的溶液呈澄清狀，不需離心自然冷卻即可。

注意：樣品應(yīng)在2小時內(nèi)進(jìn)行檢測。