基本描述
產(chǎn)品名稱：重組腸激酶
規(guī)格或純度：生物活性,重組,ActiBioPure?,高性能,EnzymoPure?,≥5 units/μl,expressed in E.coli
產(chǎn)品介紹：
腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）。
氨基酸序列：此產(chǎn)品是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。
酶學(xué)性質(zhì)：腸激酶可去除位于蛋白質(zhì)N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽。
基本特性：該酶經(jīng)HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶，可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白。
使用方法
反應(yīng)體系：
融合蛋白：0.1–1 mg/mL（蛋白總量 50–100 μg）
重組腸激酶：0.1–0.2 U
緩沖體系：25 mM Tris-HCl, pH 8.0
反應(yīng)條件：25℃過夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
結(jié)果驗證：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反應(yīng)溫度是25℃，酶切不同時間梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）
4℃低溫酶切條件：4℃能對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。
酶切結(jié)果驗證：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反應(yīng)溫度是4℃，酶切不同時間梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）
酶切優(yōu)化和放大：
優(yōu)化：可以對酶切條件進行優(yōu)化，例如緩沖液 pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切時間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。
放大：選擇優(yōu)化后的反應(yīng)條件，按該條件等比例放大，用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。
去除重組腸激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制劑親和層析去除重組腸激酶。
產(chǎn)品優(yōu)勢
特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸(DDDDK)。
無動物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料。
質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定。
純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。
符合法規(guī)要求：生產(chǎn)設(shè)備和生產(chǎn)環(huán)境符合相關(guān)法規(guī)要求，生產(chǎn)過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質(zhì)量體系并符合GMP指導(dǎo)原則。
質(zhì)量文件完整：按客戶需求，可提供相關(guān)法規(guī)支持文件。
注意事項
酶切溫度：不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現(xiàn)。
酶切條件：在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油條件下，酶切效果受影響，可參照以下推薦方法進行酶切：
推薦方法：為獲得理想酶切結(jié)果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進行酶切。若不便透析，可將樣品稀釋到咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500μg蛋白）。
如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。
磷酸鹽的影響：磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用，痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性，因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。
去除腸激酶：本品是具有高酶活力重組腸激酶，切割蛋白使用量少，可不考慮除去。后續(xù)如需去除重組腸激酶，可用陰離子交換樹脂（eg.DEAE-FF）對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下：
平衡緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脫緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
酶切效果：蛋白酶切效果不好，可適當增加酶量，或適當延長酶切時間。
生物活性：≥ 5.0 U/μl
無載體：Yes
無動物源：Yes
Accession #：P98072
預(yù)測分子量：25.8±2.6 kDa
級別：生物活性, 重組, ActiBioPure?, 高性能, EnzymoPure?
產(chǎn)品規(guī)格參數(shù)
儲存緩沖液：50 mM Tris-HCl, 250 mM NaCl, 2 mM Ca2?, 50% Glycerol, pH 8.0.
濃度：≥5 units/μl,expressed in E.coli
儲存條件：-20°C儲存
運輸條件：超低溫運輸
穩(wěn)定性與儲存：長期儲存-20℃；復(fù)溶后建議分裝，避免反復(fù)凍融。
CAS編號和信息：9014-74-8
酶學(xué)委員會編號：3.4.21.9
單位定義：在25℃，12h~16h之內(nèi)，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
功能和特點
Accession #：P98072
生物活性：≥ 5.0 U/μl
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關(guān)鍵字： 重組腸激酶;Recombinant Enterokinase;9014-74-8
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