病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Virus Dye-based qPCR Kit (未明確具體病毒) |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3794 |
產(chǎn)品概述
病毒染料法熒光定量PCR試劑盒基于SYBR Green I染料或類似熒光標(biāo)記物，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增過程中的熒光信號(hào)變化，實(shí)現(xiàn)對病毒核酸（RNA/DNA）的高靈敏度定量檢測。該技術(shù)適用于臨床診斷、科研及流行病學(xué)調(diào)查，具備特異性強(qiáng)、操作簡便、重復(fù)性好的特點(diǎn)。
產(chǎn)品組分
預(yù)混反應(yīng)液：包含熱啟動(dòng)DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及熒光染料（如2× SG Buffer）。
酶混合液：含逆轉(zhuǎn)錄酶（針對RNA病毒）及高保真聚合酶（如Hifair? UH Enzyme Mix）。
陰性/陽性對照：無核酸酶水（RNase-free H2O）及非傳染性標(biāo)準(zhǔn)品（如1×10^8拷貝/μL的DNA片段）。
稀釋液：用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的專用模板稀釋液。
技術(shù)參數(shù)
靈敏度：可檢測低至0.1 pg RNA或單拷貝DNA。
線性范圍：覆蓋5個(gè)數(shù)量級（如10^2–10^7拷貝/μL）。
特異性：引物針對病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，避免交叉反應(yīng)。
適用樣本：病毒RNA/DNA、細(xì)胞/組織提取物、微生物核酸等。
操作步驟
樣本處理：提取病毒核酸，建議使用柱式純化法確保純度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：
將陽性對照按10倍梯度稀釋（如10^7–10^2拷貝/μL），分裝至標(biāo)記離心管。
每管加入45 μL稀釋液及5 μL陽性對照，渦旋混勻。
反應(yīng)體系配制（以20 μL為例）：
10 μL 2×預(yù)混液
0.5 μL酶混合液
1 μL引物（上下游各10 μM）
2 μL模板
6.5 μL無核酸酶水
PCR程序：
逆轉(zhuǎn)錄（如50℃ 15分鐘，僅需RNA樣本）→ 預(yù)變性（95℃ 5分鐘）→ 40循環(huán)擴(kuò)增（95℃ 10秒，60℃ 30秒，72℃ 20秒）→ 熔解曲線分析（65–95℃）。
注意事項(xiàng)
防污染：操作分區(qū)進(jìn)行（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增區(qū)分離），使用帶濾芯槍頭。
質(zhì)量控制：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰性對照（無模板）及陽性對照。
儲(chǔ)存條件：-20℃長期保存，避免反復(fù)凍融；預(yù)混液4℃可穩(wěn)定24小時(shí)。
應(yīng)用示例
病毒載量檢測：如兔出血癥病毒2型、羅西奧病毒等，可通過Ct值定量分析。
熔解曲線驗(yàn)證：單一峰表明擴(kuò)增特異性，多峰提示引物二聚體或污染。
常見問題
假陰性：檢查RNA完整性或逆轉(zhuǎn)錄效率。
非特異擴(kuò)增：優(yōu)化退火溫度或重新設(shè)計(jì)引物。
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關(guān)鍵字： 病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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