細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織；主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干。其運(yùn)行路徑為：升主動(dòng)脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈；在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈，以上為胸主動(dòng)脈，至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動(dòng)脈；髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)：大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，以主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，探討心血管疾病相關(guān)發(fā)病機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)；體外培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
產(chǎn)品名稱 | 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 產(chǎn)品貨號(hào) | P-X1275 |
英文名稱 | Human Aortic Smooth Muscle Cells | 規(guī)格 | 5×10^5 |
報(bào)告 | 提供免疫熒光鑒定報(bào)告 | 組織來(lái)源 | 主動(dòng)脈組織 |
產(chǎn)品信息：
方法簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)室分離的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)室分離的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱：人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
組織來(lái)源：主動(dòng)脈組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：包被條件
培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液：0.25%胰蛋白酶人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
一、取材與分離
新鮮、無(wú)菌：組織離體越快越好，全程冰上操作。
去除雜質(zhì)：剔除脂肪、結(jié)締組織、血污，減少污染和消化干擾。
溫和消化：
控制酶濃度、溫度、時(shí)間
及時(shí)終止消化，避免細(xì)胞過(guò)度損傷
過(guò)篩過(guò)濾：去除組織塊，獲得單細(xì)胞懸液。
二、接種與培養(yǎng)
密度關(guān)鍵：原代細(xì)胞普遍怕稀，密度太低不貼壁、不長(zhǎng)。
完全貼壁后再換液：剛接種別亂動(dòng)。
專用培養(yǎng)基：
內(nèi)皮、上皮、平滑肌、神經(jīng)元等盡量用專用原代培養(yǎng)基
血清質(zhì)量影響極大，建議批次驗(yàn)證
CO?、濕度、溫度嚴(yán)格穩(wěn)定，避免頻繁開(kāi)關(guān)門(mén)。
三、傳代與凍存
不要等太滿：匯合度 70%–80% 就傳，不要等到堆積。
消化監(jiān)控：鏡下觀察細(xì)胞變圓、間隙變大立即終止。
凍存保護(hù)：
標(biāo)準(zhǔn)：90% 血清 + 10% DMSO
程序降溫，盡快轉(zhuǎn)入液氮
原代細(xì)胞凍存復(fù)蘇能力弱，盡量早凍、多凍。
四、污染與狀態(tài)判斷
一旦渾濁、pH 驟變、有顆粒：直接丟棄，不要救。
細(xì)胞狀態(tài)好：
形態(tài)均一、輪廓清晰
生長(zhǎng)均勻、無(wú)局部堆積
出現(xiàn)分化、拉長(zhǎng)、多核、空泡多：說(shuō)明老化 / 狀態(tài)差，不建議繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
凍存復(fù)蘇：
凍存的梯度降溫：
逐步降溫：細(xì)胞凍存時(shí)，先在4℃放置30分鐘，再在-20℃放置1小時(shí)，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過(guò)夜，最后放入液氮長(zhǎng)期保存，避免溫度驟變導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。
標(biāo)記清晰：凍存管上需標(biāo)記細(xì)胞名稱、代次、凍存日期和操作者姓名，避免后續(xù)復(fù)蘇時(shí)混淆。
復(fù)蘇的快速操作：
解凍后立即離心：細(xì)胞解凍后迅速轉(zhuǎn)移至含預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，離心去除含DMSO的凍存液，減少DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性。
復(fù)蘇后靜置培養(yǎng)：復(fù)蘇后的細(xì)胞接種后，24小時(shí)內(nèi)不要換液，讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間恢復(fù)狀態(tài)，24小時(shí)后再更換新鮮培養(yǎng)基。
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關(guān)鍵字： 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;成纖維細(xì)胞樣;貼壁;
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