小鼠肺成纖維細胞

產品信息：

產品名稱 小鼠肺成纖維細胞

組織來源 肺組織
種屬 小鼠

產品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

方法簡介：實驗室分離的小鼠肺成纖維細胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：實驗室分離的小鼠肺成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品名稱：小鼠肺成纖維細胞

英文簡稱：LF

組織來源：肺組織

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：包被條件

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3-5代

消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠肺成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介 ：

小鼠肺成纖維細胞分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
原代細胞實驗要點：

一、取材與分離

新鮮、無菌：組織離體越快越好，全程冰上操作。

去除雜質：剔除脂肪、結締組織、血污，減少污染和消化干擾。

溫和消化：

控制酶濃度、溫度、時間

及時終止消化，避免細胞過度損傷

過篩過濾：去除組織塊，獲得單細胞懸液。

二、接種與培養(yǎng)

密度關鍵：原代細胞普遍怕稀，密度太低不貼壁、不長。

完全貼壁后再換液：剛接種別亂動。

專用培養(yǎng)基：

內皮、上皮、平滑肌、神經元等盡量用專用原代培養(yǎng)基

血清質量影響極大，建議批次驗證

CO?、濕度、溫度嚴格穩(wěn)定，避免頻繁開關門。

三、傳代與凍存

不要等太滿：匯合度 70%–80% 就傳，不要等到堆積。

消化監(jiān)控：鏡下觀察細胞變圓、間隙變大立即終止。

凍存保護：

標準：90% 血清 + 10% DMSO

程序降溫，盡快轉入液氮

原代細胞凍存復蘇能力弱，盡量早凍、多凍。

四、污染與狀態(tài)判斷

一旦渾濁、pH 驟變、有顆粒：直接丟棄，不要救。

細胞狀態(tài)好：

形態(tài)均一、輪廓清晰

生長均勻、無局部堆積

出現(xiàn)分化、拉長、多核、空泡多：說明老化 / 狀態(tài)差，不建議繼續(xù)實驗。
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凍存復蘇：

凍存的梯度降溫：

逐步降溫：細胞凍存時，先在4℃放置30分鐘，再在-20℃放置1小時，隨后轉移至-80℃冰箱過夜，最后放入液氮長期保存，避免溫度驟變導致細胞內冰晶形成。

標記清晰：凍存管上需標記細胞名稱、代次、凍存日期和操作者姓名，避免后續(xù)復蘇時混淆。

復蘇的快速操作：

解凍后立即離心：細胞解凍后迅速轉移至含預熱培養(yǎng)基的離心管中，離心去除含DMSO的凍存液，減少DMSO對細胞的毒性。

復蘇后靜置培養(yǎng)：復蘇后的細胞接種后，24小時內不要換液，讓細胞有足夠的時間恢復狀態(tài)，24小時后再更換新鮮培養(yǎng)基。