小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱 小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞
組織來源 膽管組織
種屬 小鼠
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
英文名稱 | Mouse Extrahepatic Bile Duct Epithelial Cells | 規(guī)格 | 5×105 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 貨號 | P-X1814 |
培養(yǎng)信息：
方法簡介：實驗室分離的小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化，接種至預(yù)先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中，通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：實驗室分離的小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱：小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞
組織來源：膽管組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%胰蛋白酶小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡介 ：
小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。臨床上常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]鎖、先天性膽總管囊腫、原發(fā)性硬化性膽管炎等，都是以膽管上皮細(xì)胞為病變的靶位，引起膽管上皮的損傷。了解正常膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征和病變膽管上皮細(xì)胞的病理生理學(xué)特征對研究膽管病變的發(fā)病機制、診斷和治療具有重要意義。
原代細(xì)胞分離：
組織取材
無菌操作是底線：取材前對動物/組織進行嚴(yán)格消毒，全程在超凈臺內(nèi)操作，所有工具提前滅菌
新鮮度決定活性：取材后立即放入預(yù)冷的含雙抗的PBS中，30分鐘內(nèi)完成分離，若無法即時處理，可暫存于4℃冰箱（不超過24小時）
精準(zhǔn)取材：避開血管、脂肪、結(jié)締組織等非目標(biāo)組織，比如分離肝細(xì)胞時要剔除膽囊，分離神經(jīng)細(xì)胞時要去除腦膜
組織處理
機械法：通過剪碎、研磨、過濾等方式分散組織，適用于結(jié)締組織較少的組織（如肝臟、腎臟），注意力度適中，避免過度研磨損傷細(xì)胞
酶解法：根據(jù)組織類型選擇合適的酶：
胰蛋白酶：適用于消化上皮組織、肝、腎等，濃度0.25%-0.5%，消化時間15-30分鐘，37℃
膠原酶：適用于消化結(jié)締組織、脂肪組織、肌肉組織等，濃度0.1%-0.3%，消化時間1-4小時，37℃，可加入EDTA增強效果
透明質(zhì)酸酶：常與膠原酶聯(lián)用，消化軟骨、滑膜等富含透明質(zhì)酸的組織
聯(lián)合法：機械剪碎后再進行酶解，兼顧效率與細(xì)胞活性
細(xì)胞篩選與純化
過濾：使用200-400目細(xì)胞篩過濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織塊
離心：800-1200RPM離心5-8分鐘，棄上清后用PBS重洗2-3次，去除細(xì)胞碎片和酶液
特異性純化：使用差速貼壁法（利用不同細(xì)胞貼壁速度差異）、密度梯度離心法（如Percoll、Ficoll）、免疫磁珠分選或流式細(xì)胞術(shù)，獲得高純度目標(biāo)細(xì)胞
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原代細(xì)胞實驗注意事項：
取材要快、要新鮮、全程無菌
組織離體時間越短越好，冰上操作，減少缺血損傷。
嚴(yán)格控制細(xì)胞代數(shù)
原代細(xì)胞只建議用 P0～P3，代數(shù)越高越容易分化、結(jié)果越不可靠。
接種密度寧高不低
原代細(xì)胞普遍怕稀，太稀不貼壁、不生長、容易凋亡。
消化是關(guān)鍵，寧輕勿重
胰酶 / 膠原酶只消化到細(xì)胞變圓就終止，過度消化必死一批。
吹打輕柔，避免機械損傷。
培養(yǎng)基和血清不要隨便換批次
血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、添加因子固定廠家固定批次，換批次必須先預(yù)實驗。
避免頻繁折騰細(xì)胞
少開培養(yǎng)箱門，不反復(fù)觀察、不反復(fù)拿進拿出，溫度、pH 波動對原代殺傷極大。
關(guān)鍵字： 小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞;上皮細(xì)胞樣;貼壁;
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