產(chǎn)品介紹：
這類試劑盒是目前ASFV檢測的主流產(chǎn)品，因其高靈敏度、高特異性和帶有內(nèi)參監(jiān)控系統(tǒng)而被廣泛應(yīng)用于各級實驗室。
產(chǎn)品名稱 | 非洲豬瘟病毒（ASFV）核酸檢測試劑盒（帶內(nèi)參，PCR-熒光探針法） | 貨號 | AP3599 |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR | 規(guī)格 | 48T |
?? 檢測原理
該試劑盒基于雙重?zé)晒舛?/span>PCR（qPCR）技術(shù)，采用TaqMan探針法。
雙通道檢測：
FAM通道（檢測通道）：針對非洲豬瘟病毒（ASFV）的高度保守基因（如P72基因或MGF基因）設(shè)計特異性引物和探針。如果樣本中含有ASFV DNA，該通道會檢測到熒光信號的指數(shù)級增長。
HEX/VIC通道（內(nèi)參通道）：針對豬的內(nèi)源性基因（如β-actin或18S rRNA）設(shè)計引物和探針。該通道用于監(jiān)控樣本采集質(zhì)量、核酸提取效率以及反應(yīng)體系是否正常，防止因樣本抑制或操作失誤導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。
? 主要優(yōu)勢
高靈敏度與特異性：能夠檢測出極低拷貝數(shù)的病毒DNA（部分產(chǎn)品檢測限可達5-103 copies/mL），且能特異性識別ASFV，與其他豬源病原體無交叉反應(yīng)。
結(jié)果可靠（帶內(nèi)參）：內(nèi)置內(nèi)參系統(tǒng)是此類試劑盒的核心優(yōu)勢。如果內(nèi)參檢測失?。o擴增曲線），說明樣本采集不當(dāng)、核酸降解或存在PCR抑制物，該樣本需重新采樣或處理，從而有效避免了“假陰性”漏檢。
快速高效：整個檢測流程（含核酸提取）通常在2-3小時內(nèi)完成，遠快于傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)。
操作便捷：市面上多數(shù)產(chǎn)品采用預(yù)混液形式（2×Master Mix），只需加入模板即可上機，降低了操作誤差。
?? 典型產(chǎn)品參數(shù)
項目 參數(shù)/規(guī)格
檢測方法 實時熒光定量PCR（探針法）
包裝規(guī)格 48T / 48T / 盒
保存條件 -20℃避光保存，避免反復(fù)凍融
檢測儀器 ABI 7500、Roche LightCycler、Bio-Rad CFX96等
檢測樣本 豬全血（EDTA抗凝）、脾臟、淋巴結(jié)、腎臟組織、環(huán)境拭子等
?? 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)
檢測結(jié)果需同時滿足質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和樣本判定標(biāo)準(zhǔn)。
1. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（實驗有效性）
陽性對照：FAM通道應(yīng)出現(xiàn)典型的S型擴增曲線，且Ct值通常 ≤ 30-35（具體視說明書而定）。
陰性對照：FAM通道無擴增曲線或Ct值 ≥ 40。
內(nèi)參（內(nèi)源性對照）：所有樣本（包括陰陽性對照）的HEX/VIC通道均應(yīng)出現(xiàn)擴增曲線且Ct值正常（通常在20-30之間），表明樣本無抑制、提取成功。
2. 樣本判定標(biāo)準(zhǔn)
陽性（+）：FAM通道出現(xiàn)典型的S型擴增曲線，且Ct值 ≤ 35（或說明書規(guī)定的閾值）。
陰性（-）：FAM通道無擴增曲線，或Ct值 ≥ 40。
可疑（±）：Ct值在35-40之間，且有明顯的指數(shù)增長趨勢。建議對該樣本進行復(fù)測，若復(fù)測結(jié)果仍在此區(qū)間或判定為陽性，則報告為陽性。
?? 注意事項
樣本采集：抗凝血首選EDTA抗凝，嚴禁使用肝素抗凝（肝素會抑制PCR反應(yīng)）。組織樣品需充分研磨。
防止污染：由于靈敏度極高，必須嚴格分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)），使用帶濾芯的吸頭，防止氣溶膠污染導(dǎo)致假陽性。
臨床意義：該檢測僅用于檢測病毒核酸，陽性結(jié)果表明樣本中存在ASFV核酸，需結(jié)合臨床癥狀（如高熱、皮膚發(fā)紺、死亡率異常升高等）和病理剖檢進行綜合判斷。環(huán)境樣品檢測陽性需立即進行徹底消毒。
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PCR試劑盒的核心類型
1. 常規(guī)PCR試劑盒
原理：通過引物擴增目標(biāo)DNA片段，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳檢測。
特點：操作簡單、成本低，適用于定性檢測（如牛皰疹病毒1型PCR試劑盒）。
典型應(yīng)用：動物病原體篩查。
2. 熒光定量PCR（qPCR）試劑盒
探針法（TaqMan）：
利用特異性探針結(jié)合目標(biāo)序列，熒光信號實時監(jiān)測擴增過程。
優(yōu)勢：高特異性（如牛白血病病毒試劑盒）、寬線性范圍（102–10?拷貝/μL）。
染料法（SYBR Green）：
染料嵌入雙鏈DNA發(fā)光，成本較低，但需優(yōu)化引物特異性。
3. 恒溫擴增試劑盒
技術(shù)：LAMP、RPA等，無需熱循環(huán)儀，適合現(xiàn)場檢測。
關(guān)鍵字： 非洲豬瘟病毒 ;ASFV 帶內(nèi)參;核酸檢測試劑盒;PCR-熒光探針法;
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