測(cè)定意義 :
NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化
NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
| 產(chǎn)品名稱 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒(比色法) | 規(guī)格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
| 檢測(cè)方法 | 可見分光光度法、微量法 | 貨號(hào) | AS63212 |
測(cè)定原理
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過PMS
的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出
NADK活性的大小。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
適用樣本與實(shí)驗(yàn)條件:
?廣泛種屬通用?:適用于動(dòng)物(人、鼠、兔等)的血清、血漿、組織勻漿,以及植物葉片、微生物菌液和培養(yǎng)細(xì)胞裂解液。
?所需儀器?:可見分光光度計(jì)(或酶標(biāo)儀)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器及相應(yīng)規(guī)格的比色皿(玻璃或石英)。
?溫度控制?:反應(yīng)通常在 37℃(哺乳動(dòng)物樣本)或 25℃(植物/微生物樣本)下進(jìn)行,需嚴(yán)格控溫以保證酶活穩(wěn)定性。
主流檢測(cè)方法:
目前市面上的 NADK 測(cè)試盒主要采用以下兩種檢測(cè)原理,用戶需根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器選擇:
?一、可見分光光度法?:
?原理?:利用 NADPH 還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),在 600 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度變化來(lái)反映酶活性。
?所需儀器?:可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)等。
?特點(diǎn)?:操作經(jīng)典,適合配備傳統(tǒng)分光光度計(jì)的實(shí)驗(yàn)室。
?二、微量法(酶標(biāo)儀法)?:
?原理?:同樣基于 MTT 還原反應(yīng)或直接在 340 nm 下測(cè)定 NADPH 生成速率,但樣本用量更少。
?所需儀器?:酶標(biāo)儀、微量石英比色皿或 96 孔板。
?特點(diǎn)?:高通量,節(jié)省珍貴樣本和試劑成本。
操作步驟:
試劑準(zhǔn)備?:按說明書將凍干粉試劑用蒸餾水溶解,部分試劑需臨用前稀釋 100 倍使用。
?加樣反應(yīng)?:在比色皿中依次加入提取液、試劑一、試劑二及樣本,充分混勻。
?數(shù)據(jù)測(cè)定?:在 600nm 波長(zhǎng)下,記錄反應(yīng)初期(如 30 秒)及反應(yīng)一段時(shí)間后(如 3 分 30 秒)的吸光值。
?結(jié)果計(jì)算?:根據(jù)測(cè)定孔與對(duì)照孔的吸光度差值(ΔOD),結(jié)合反應(yīng)時(shí)間、蛋白濃度及標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算酶活力單位。
注意事項(xiàng):
溫度控制?:粗酶液提取必須在冰上操作,除特定試劑外,其他試劑測(cè)定過程中也需置于冰上。
?試劑毒性?:部分試劑盒中的遞氫體或顯色劑(如試劑九)可能具有毒性,操作時(shí)請(qǐng)佩戴手套并在通風(fēng)櫥進(jìn)行。
?儀器要求?:需自備可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)及 1mL 玻璃比色皿。
?適用范圍?:該試劑盒僅適用于科研實(shí)驗(yàn),不可用于臨床診斷。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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關(guān)鍵字: NAD激酶;NADK;含量測(cè)試盒;
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