大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱 大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞
組織來源 正常腎組織
種屬 大鼠
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
英文名稱 | Primary renal interstitial fibroblasts in rats | 規(guī)格 | 5×105 |
細(xì)胞形態(tài) | 長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 | 貨號 | P-X1600 |
細(xì)胞簡介：
細(xì)胞詳述
腎間質(zhì)是指腎臟血管和腎小管間的區(qū)域，為疏松的結(jié)締組織構(gòu)成，由間質(zhì)細(xì)胞、網(wǎng)狀纖維、少量彈力纖維、成纖維細(xì)胞核巨噬細(xì)胞等組成。
細(xì)胞特性
1) 組織來源于實(shí)驗(yàn)動物的正常腎組織。
2) 細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基：
推薦使用 delf原代 成纖維 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)試劑。
產(chǎn)品定義：
大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞是存在于大鼠腎臟間質(zhì)中的成纖維細(xì)胞，主要分布于腎小管周圍。它可合成和分泌膠原蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)，維持腎臟間質(zhì)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在腎臟損傷時可被激活轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，大量分泌細(xì)胞外基質(zhì)，參與腎間質(zhì)纖維化的形成過程，是研究慢性腎臟病發(fā)病機(jī)制的重要細(xì)胞模型。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
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原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)常見問題：
污染防控：實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格無菌操作，超凈工作臺使用前紫外消毒30分鐘，實(shí)驗(yàn)用品需高壓滅菌；定期對培養(yǎng)箱、水浴鍋等設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒，避免細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞老化與分化：原代細(xì)胞傳代次數(shù)有限，通常傳至3-5代后會出現(xiàn)老化，需及時凍存早期代次細(xì)胞；培養(yǎng)過程中避免過度傳代、營養(yǎng)缺乏、環(huán)境刺激等因素，防止細(xì)胞自發(fā)分化。
實(shí)驗(yàn)重復(fù)性保障：每次實(shí)驗(yàn)使用同一來源、同一代次的細(xì)胞，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件（如培養(yǎng)基批次、消化時間、培養(yǎng)時間等），設(shè)置足夠的重復(fù)樣本，減少實(shí)驗(yàn)誤差。
關(guān)鍵字： 大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞;長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞; 貼壁;
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