大鼠腎足細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱 大鼠腎足細(xì)胞
組織來源 正常腎臟組織
種屬 大鼠
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
英文名稱 | Rat renal podocyte | 規(guī)格 | 5×105 |
細(xì)胞形態(tài) | 不規(guī)則，含足突細(xì)胞 | 貨號(hào) | P-X1590 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
細(xì)胞詳述
腎小球?yàn)檠哼^濾器，腎小球毛xi血管壁構(gòu)成過濾膜。腎小球過濾膜從內(nèi)到外有三層結(jié)構(gòu)：內(nèi)層為內(nèi)皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細(xì)胞層，上皮細(xì)胞又稱足細(xì)胞，其不規(guī)則突起稱足突，其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾膜過濾后，濾液入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質(zhì)不能濾過而保留于血液中，僅小分子物質(zhì)如尿素、葡萄糖、電解質(zhì)及某些小分子蛋白能濾過。
腎足細(xì)胞即腎小球上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜的外側(cè)，連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。
足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，呈指狀交叉覆蓋于腎小球基底膜外表面，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與腎小球基底膜相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌腎小球基底膜的主要組成成分 IV型膠原和纖維連接蛋白,在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解腎小球基底膜作用的基質(zhì)金屬蛋白酶和組織蛋白酶，從而在腎小球基底膜的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。
細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常腎臟組織。
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或WT-1（Wilm'sTumorProtein）免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式：不規(guī)則，含足突細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基：
我們推薦使用 Delf 原代腎足 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
產(chǎn)品定義：
大鼠腎足細(xì)胞是存在于大鼠腎小球臟層上皮細(xì)胞的一種特殊細(xì)胞，其胞體伸出許多足突，與腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及基底膜共同構(gòu)成腎小球?yàn)V過屏障。足突之間的裂孔膜可阻止蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)濾過，在腎小球?yàn)V過功能中發(fā)揮關(guān)鍵作用，是研究腎小球腎炎、腎病綜合征及腎功能衰竭發(fā)病機(jī)制的重要細(xì)胞模型。
原代細(xì)胞傳代：
傳代時(shí)機(jī)判斷
細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞過度匯合導(dǎo)致接觸抑制，影響增殖能力
觀察細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞形態(tài)正常，無明顯漂浮、污染跡象
消化環(huán)節(jié)控制
消化前準(zhǔn)備：吸出舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞1-2次，去除血清（血清會(huì)抑制胰蛋白酶活性）
消化液選擇：同原代分離，根據(jù)細(xì)胞類型選擇合適的消化酶，胰蛋白酶消化時(shí)間一般為1-5分鐘，膠原酶消化時(shí)間為10-30分鐘
消化終止：顯微鏡下觀察到細(xì)胞回縮變圓、間隙增大時(shí)，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，血清濃度不低于10%
細(xì)胞吹打：用移液器輕輕吹打細(xì)胞，避免過度用力導(dǎo)致細(xì)胞破裂，吹打次數(shù)一般為10-15次
傳代比例控制
傳代比例根據(jù)細(xì)胞生長速度調(diào)整：生長速度快的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可按1:3-1:6傳代，生長速度慢的細(xì)胞（如內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞）按1:2傳代
首次傳代比例可適當(dāng)提高（如1:2），待細(xì)胞適應(yīng)體外培養(yǎng)環(huán)境后再調(diào)整為常規(guī)比例
傳代后培養(yǎng)
接種后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
24小時(shí)內(nèi)不要晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，避免細(xì)胞貼壁不牢
培養(yǎng)24-48小時(shí)后觀察細(xì)胞貼壁情況，更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片
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細(xì)胞分離與接種：
酶消化的“度”：酶液濃度和消化時(shí)間需精準(zhǔn)控制，如胰蛋白酶濃度通常為0.25%，消化時(shí)間5-15分鐘（根據(jù)組織類型調(diào)整），消化期間每隔3-5分鐘輕輕晃動(dòng)容器，鏡下觀察到細(xì)胞變圓、間隙增大時(shí)，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
吹打力度適中：用巴氏吸管吹打細(xì)胞懸液時(shí)，避免用力過猛產(chǎn)生大量氣泡，以吹打后細(xì)胞懸液呈均勻霧狀為宜，一般吹打10-15次即可，過度吹打會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂。
接種密度適配：根據(jù)細(xì)胞增殖速度調(diào)整接種密度，增殖快的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可適當(dāng)降低密度，增殖慢的細(xì)胞（如神經(jīng)元）需提高接種密度，確保細(xì)胞能相互支持生長。
關(guān)鍵字： 大鼠腎足細(xì)胞;不規(guī)則，含足突細(xì)胞; 貼壁;
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