人直腸平滑肌細胞
產品信息：
英文名稱 | Human Rectal Smooth Muscle Cells | 種屬 | 人 |
產品規(guī)格 | 5×10^5Cells/T25 | 貨號 | A01X1306 |
組織來源 | 直腸組織 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介：
人直腸平滑肌分離自直腸組織；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結腸，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈，下端以而終。直腸上端的大小似結腸，其下端擴大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，下端變細接管。直腸在盆腔內的位置與骶椎腹面關系密切，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側。直腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈，來自髂內動脈的直腸中動脈和來自髂內動脈的直腸下動脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運動方式；腸炎時由于平滑肌特殊肌動蛋白的增加導致了平滑肌層的增厚。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產生，這進一步證明了炎癥時的腸平滑肌細胞具有可塑性。利用腸平滑肌細胞的培養(yǎng)，可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結締組織對平滑肌細胞的反應。
方法簡介 公司實驗室分離的人直腸平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測 公司實驗室分離的人直腸平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
關鍵操作技巧與注意事項：
成功的原代培養(yǎng)依賴于嚴謹的細節(jié)控制：
嚴格無菌操作：這是實驗成功的基石。所有操作需在生物安全柜中進行，試劑和耗材必須無菌。
保持靜置：細胞接種后的最初24-48小時內，應保持培養(yǎng)瓶絕對靜置，避免頻繁取出觀察或晃動，這有助于細胞貼壁和伸展。
優(yōu)化消化過程：
消化時間要恰到好處，過長會損傷細胞，過短則細胞分散不佳。
膠原酶對組織的損傷較小，常用于分離活性要求高的細胞；胰蛋白酶作用較強，需嚴格控制時間。
酶液應新鮮配制，避免活性下降。
控制接種密度：原代細胞在低密度下不易存活，建議適當提高初始接種密度，以保證細胞間的相互作用促進其生長。
定期換液：根據培養(yǎng)基顏色變化（如變黃）或每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，以清除代謝廢物并補充營養(yǎng)。
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細胞培養(yǎng)操作
消化培養(yǎng)法
此方法利用酶（如胰蛋白酶、膠原酶）將組織分散成單個細胞或細胞團，形成細胞懸液進行培養(yǎng)，細胞生長較快。
取材與剪切
同樣在無菌條件下獲取組織，并用Hanks液清洗干凈。
將組織剪切成更小的碎塊（約 1 mm3），以便酶更好地發(fā)揮作用。
酶消化
將組織塊轉移至容器中，加入適量的酶消化液（如0.25%胰蛋白酶）。
在 37℃ 條件下消化 20-40分鐘，期間可適當搖動或吹打。消化程度需在顯微鏡下觀察，當組織分散成細胞團或單個細胞時，立即終止消化。
終止與洗滌
加入含血清的培養(yǎng)液以終止酶的消化作用（血清可抑制胰蛋白酶活性）。
將細胞懸液通過篩網過濾，除去未消化的組織塊。然后以 1000 rpm 離心 5-10分鐘，棄去上清液。
接種與培養(yǎng)
用適量新鮮培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，進行細胞計數，并調整細胞密度至實驗所需濃度（例如 5×10? cells/mL）。
將細胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5% CO? 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
關鍵字： 人直腸平滑肌細胞;直腸組織;貼壁;
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