破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Clostridium tetani Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4001 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用:用戶僅需提供待測(cè)DNA模板,操作便捷。
高特異性:引物針對(duì)破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌保守序列設(shè)計(jì),與其他病原體無(wú)交叉反應(yīng)。
高靈敏度:檢測(cè)下限可達(dá)數(shù)百拷貝/反應(yīng)。
閉管檢測(cè):一管式熒光定量PCR設(shè)計(jì),避免擴(kuò)增產(chǎn)物污染。
穩(wěn)定可靠:含陽(yáng)性對(duì)照(1×10? 拷貝/μL),便于結(jié)果驗(yàn)證。
規(guī)格及成分
| 成分 | 包裝規(guī)格 | 備注 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL(棕色管) | 預(yù)混PCR反應(yīng)液 |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) | 用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋 |
| PCR引物混合物 | 100μL(白蓋) | 特異性引物及探針 |
| PCR陽(yáng)性對(duì)照 | 50μL(紅蓋) | 1×10? 拷貝/μL |
| 使用手冊(cè) | 1份 | 詳細(xì)操作步驟及注意事項(xiàng) |
運(yùn)輸與保存
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸(冰袋或干冰)。
保存條件:-20℃避光保存,有效期12個(gè)月。
自備試劑
DNA模板(待測(cè)樣品)。
10×ROX熒光校正染料(僅限ABI 7500/7700/7900機(jī)型需使用)。
使用方法
陽(yáng)性對(duì)照稀釋(6個(gè)梯度制備)
標(biāo)記離心管:編號(hào)為2-7號(hào),分別對(duì)應(yīng)102-10?拷貝/μL梯度。
稀釋步驟:
7號(hào)管加入45μL稀釋液及5μL陽(yáng)性對(duì)照(原液),震蕩混勻,得10?拷貝/μL。
依次轉(zhuǎn)移5μL至下一管,重復(fù)稀釋至2號(hào)管(102拷貝/μL)。
注意事項(xiàng):
使用帶濾芯槍頭,防止氣溶膠污染。
稀釋操作需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行,避免交叉污染。
熒光定量PCR反應(yīng)(20μL體系)
反應(yīng)體系配制:
| 組分 | 體積(μL) |
| 2×qPCR MagicMix | 10 |
| 引物混合物 | 2 |
| 模板DNA/陽(yáng)性對(duì)照 | 5 |
| ROX(若需) | 0.4 |
| ddH?O | 補(bǔ)至20 |
PCR程序推薦:
預(yù)變性:95℃ 3分鐘。
循環(huán):95℃ 15秒 → 60℃ 60秒(40循環(huán))。
熒光信號(hào)采集:60℃延伸階段。
數(shù)據(jù)分析:
以陽(yáng)性對(duì)照Ct值為縱軸、濃度對(duì)數(shù)為橫軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算待測(cè)樣本拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
本試劑盒陽(yáng)性對(duì)照為DNA片段,不含活菌,無(wú)生物安全風(fēng)險(xiǎn)。
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)),避免污染。
不同儀器需優(yōu)化循環(huán)參數(shù),具體參考設(shè)備說(shuō)明書。
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