基本描述
產(chǎn)品名稱：分散酶Ⅱ
規(guī)格或純度：無動(dòng)物源,生物活性,ActiBioPure?,天然,高性能,無支原體,EnzymoPure?,來源于多粘芽孢桿菌; 300-360 PU/mg enzyme powder
產(chǎn)品介紹：
組織培養(yǎng)用酶 Dispase 是切斷肽鏈的中性及非極性氨基酸 N 端的金屬蛋白酶，能夠把上皮細(xì)胞從組織上剝離成片狀，長(zhǎng)期以來用于原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離與分散，近年來也被應(yīng)用于再生醫(yī)療領(lǐng)域。與胰蛋白酶和膠原酶等蛋白酶的作用不同，Dispase 造成的細(xì)胞損傷更少，可溫和地分散細(xì)胞，因此在 ES 和 iPS 細(xì)胞等新興領(lǐng)域中被應(yīng)用于細(xì)胞的分散和傳代。
產(chǎn)品信息
| 項(xiàng)目號(hào) | D1516119
| D1516122
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| 品名 | 分散酶Ⅰ
| 分散酶Ⅱ
| | 包裝 | 結(jié)晶酶，無菌產(chǎn)品
| 粉末酶，非無菌產(chǎn)品
| | 酶活性 | 10,000–13,000 PU/vial
| 300-360 PU/mg enzyme powder
| | 添加劑等 | 含有醋酸鈣 | 含有糊精和醋酸鈣 | | 儲(chǔ)存方法及有效期 | 生產(chǎn)后在 2～8℃下可儲(chǔ)存 2 年（未開封）；開封溶解后請(qǐng)凍存在 - 20℃以下，并在 6 個(gè)月內(nèi)使用。 | 生產(chǎn)后在 2～8℃下可儲(chǔ)存 2 年（未開封）；開封溶解后請(qǐng)凍存在 - 20℃以下，并在 6 個(gè)月內(nèi)使用 |
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主要特點(diǎn)
- Dispase 是 Paenibacillus sp. (舊名：Bacillus polymyxa) 來源的中性金屬蛋白酶，活性中心含有 Zn2?，并使用 Ca2?穩(wěn)定其活性。
- 酶活性幾乎不受血清影響，無論有無血清均可使用。添加 EDTA 等螯合劑、使用新鮮培養(yǎng)基或緩沖液清洗細(xì)胞即可停止酶促反應(yīng) 。
- 可以很好地分解組成基底膜的 Ⅳ 型膠原、纖連蛋白，使上皮細(xì)胞從組織上剝離成片狀。
- 與胰蛋白酶、膠原酶等蛋白酶的作用不同，細(xì)胞損傷少，可溫和地分散細(xì)胞。
- 作用條件范圍廣泛，可以在不同的濃度、處理時(shí)間、溫度以及 pH 條件下起作用。
- 在一般細(xì)胞培養(yǎng)溫度 (37℃) 下非常穩(wěn)定，對(duì)于部分類型細(xì)胞，添加本產(chǎn)品至培養(yǎng)基可實(shí)現(xiàn)懸浮培養(yǎng) 。
- 本產(chǎn)品無動(dòng)物源成分，不含支原體。
使用方法
分散酶Ⅰ ：需在無菌條件下溶解制備。打開鋁蓋，用消毒乙醇對(duì)瓶塞及其周圍區(qū)域進(jìn)行消毒，使用已滅菌的注射器吸取所需量的培養(yǎng)基或緩沖液，注入瓶中進(jìn)行溶解。鋁蓋容易劃傷手指，操作時(shí)請(qǐng)注意安全。
分散酶Ⅱ：稱量所需量的分散酶Ⅱ粉末，使用培養(yǎng)基或緩沖液溶解。在潔凈環(huán)境下進(jìn)行 0.2 μm 過濾滅菌。
作用條件
| 酶濃度 | 100 ~ 2000 PU/mL | | 溶解緩沖液 | 含有 Ca2?的緩沖液或者培養(yǎng)基（可含血清）
| | 反應(yīng)時(shí)間 | 30 min ~ 幾天 | | 反應(yīng)溫度 | 室溫～37℃ | | 反應(yīng) pH | 6.5 ~ 9.0 | | 抑制劑 | EDTA、Fe3+、Fe2+、Ni2+、Cu2+、Al3+、Zn2+
* 本酶的活性中心含有 Zn2?，如反應(yīng)溶液中含有過量的 Zn2?，則酶活性可能受到抑制 |
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活性檢測(cè)法
將 1 mL 酶溶液 (50 PU/mL，含 2 mM 醋酸鈣的 50 mM Tris-HCl 緩沖液) 添加到 5 mL 0.6% 酪蛋白水溶液 (pH 7.5，含 2 mM 醋酸鈣的 50 mM Tris-HCl 緩沖液) 中，在 30℃下反應(yīng) 10 min。反應(yīng)結(jié)束后，加入 5 mL 三氯乙酸試劑終止反應(yīng)。在 30℃下靜置 30 min 并進(jìn)行過濾后，檢測(cè) 275 nm 吸光度。
在此條件下，1 PU (Protease Unit) 定義為 1 min 內(nèi)水解酪蛋白產(chǎn)生相當(dāng)于 1 μg 酪氨酸的酶量。(活性單位 (PU) 指 Protease Unit)
注）三氯乙酸試劑：使用蒸餾水溶解無水醋酸鈉 1.8%(w/v)、三氯乙酸 1.8%(w/v)、醋酸 1.98%(w/v) 后，將 pH 調(diào)整到 4.0 后得到的試劑。
使用注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為研究用試劑，請(qǐng)勿將本產(chǎn)品用于人或動(dòng)物的活體實(shí)驗(yàn)以及診斷用途。
2. 本產(chǎn)品為分散酶，接觸到眼睛、口腔、皮膚或粘膜等部位可能引起炎癥。如不慎直接接觸，請(qǐng)立即用大量流水進(jìn)行沖洗，必要時(shí)盡快就醫(yī)。
3. 本產(chǎn)品為保證酶穩(wěn)定性，成分中含有醋酸鈣。因此本產(chǎn)品在高濃度的磷酸緩沖液中使用時(shí)會(huì)產(chǎn)生白色沉淀 (鈣鹽)，酶活性和酶穩(wěn)定性可能下降。
4. 對(duì)于酶溶液和作用條件，推薦使用含有胎牛血清的培養(yǎng)基，有利于分散以及分散后的細(xì)胞增殖。
5. 打開鋁蓋時(shí)容易劃傷手指，操作時(shí)請(qǐng)注意安全。
6. 請(qǐng)將本產(chǎn)品置于規(guī)定的儲(chǔ)存條件下進(jìn)行儲(chǔ)存，請(qǐng)勿使用過期產(chǎn)品。
7. 請(qǐng)將 Dispase 溶液于 - 20℃下冷凍儲(chǔ)存，并在 6 個(gè)月內(nèi)使用完畢。
8. 廢棄本產(chǎn)品時(shí)，請(qǐng)遵守廢棄物處理的相關(guān)條例，妥善處理。
Q&A
1. 關(guān)于 Dispase Ⅰ 和 Dispase Ⅱ
Q1： Dispase Ⅰ 和 Dispase Ⅱ的區(qū)別？
A1：
Dispase Ⅰ：結(jié)晶酶，無菌，含醋酸鈣；
Dispase Ⅱ：粉末狀酶，非無菌，含糊精和醋酸鈣（溶解后根據(jù)需求進(jìn)行過濾滅菌）。
※ Ⅰ和Ⅱ的純化程度略有不同（Ⅰ的純化程度更高）。
Q2：Dispase Ⅰ 和 Dispase Ⅱ 在使用時(shí)有哪些注意事項(xiàng)？是否適用于不同的實(shí)驗(yàn)體系？
A2：可用于多種細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)體系，目前尚未有不適用的實(shí)驗(yàn)體系情況反饋。需注意，因包裝不同，開封后應(yīng)根據(jù)存儲(chǔ)條件決定如何使用產(chǎn)品。
Dispase Ⅰ：真空密封，基本上需一次性使用完畢；
Dispase Ⅱ：粉末分裝使用。
2. 關(guān)于使用方法
Q1：推薦濃度是多少？
A1：推薦濃度如產(chǎn)品說明書所示：100～2,000 PU/mL。建議可先在該濃度范圍內(nèi)摸索合適的濃度。
Q2：將上皮細(xì)胞剝離至薄片時(shí)的推薦濃度為？
A2：酶的效果取決于細(xì)胞類型和培養(yǎng)條件，對(duì)此無法提供明確的推薦濃度。請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書中的濃度100-2000 PU/mL，摸索合適的使用濃度。此外，濃度相同時(shí)， DispaseⅠ 和 Dispase Ⅱ在使用上沒有明顯差異。
Q3：酶活性、穩(wěn)定性與Ca2?相關(guān)，那在不含Ca2?的PBS（-）或 HBSS中是否還能發(fā)揮作用？
A3：如產(chǎn)品說明書所述，在磷酸鹽緩沖溶液中使用時(shí)，可能出現(xiàn)白色沉淀或酶活性、穩(wěn)定性會(huì)降低。因此，需盡量避免使用磷酸鹽緩沖溶液，建議在含有Ca2?條件下使用該產(chǎn)品。
Q4：可以使用PBS (-)嗎？
A4：可以使用，但酶活性和穩(wěn)定性可能會(huì)降低。請(qǐng)調(diào)整酶添加量（酶濃度）并在溶解后立即使用。
Q5：使用時(shí)Ca2?的推薦濃度是多少？
A5：僅需幾mM即可充分發(fā)揮作用。
Q6：前面提到使用含鈣的緩沖液或培養(yǎng)基作為酶的溶解液，如果使用含胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基，濃度是否可以調(diào)整為10%？
A6：可以。
3. 關(guān)于作用
Q1：除了可分解IV 型膠原蛋白和纖連蛋白外，是否還可分解其他的基底膜蛋白？
A1：對(duì)層粘連蛋白有輕微的分解作用。
Q2：經(jīng)過 Dispase 散酶處理后是否會(huì)對(duì)細(xì)胞存活率或細(xì)胞基因造成影響？
A2：細(xì)胞存活率因條件不同會(huì)有較大差異。 而對(duì)基因的影響尚未得到證實(shí)。
N-末端序列：1 PU定義為1 min內(nèi)水解酪蛋白產(chǎn)生相當(dāng)于1 μg 酪氨酸的酶量。（活性單位（PU）指Protease Unit）
無動(dòng)物源：Yes
級(jí)別：無動(dòng)物源, 生物活性, ActiBioPure?, 天然, 高性能, 無支原體, EnzymoPure?
產(chǎn)品規(guī)格參數(shù)
濃度：來源于多粘芽孢桿菌; 300-360 PU/mg enzyme powder
復(fù)溶：Reconstitute in buffer or medium containing Ca2? (serum may be included).
儲(chǔ)存條件：2-8°C儲(chǔ)存
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸
穩(wěn)定性與儲(chǔ)存：未開封長(zhǎng)期儲(chǔ)存2-8℃（24個(gè)月）；復(fù)溶后建議分裝，-20℃儲(chǔ)存（6個(gè)月）。
CAS編號(hào)和信息：42613-33-2
功能和特點(diǎn)
查看阿拉丁官網(wǎng)此產(chǎn)品相關(guān)對(duì)應(yīng)頁面：https://www.aladdin-e.com/zh_cn/D1516122.html
關(guān)鍵字： 分散酶 II ; 中性蛋白酶 II ; 蛋白酶 來源于多粘芽孢桿菌;Dispase II
上海阿拉丁生化科技股份有限公司是A股上市公司（（股票代碼：688179），專注于科研試劑的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售，已陸續(xù)建立多個(gè)工廠和研發(fā)中心。作為領(lǐng)軍企業(yè)，阿拉丁始終堅(jiān)持質(zhì)量第一，連續(xù)13年被評(píng)為“最受歡迎試劑品牌”。
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