綠膿假單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 綠膿假單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Pseudomonas aeruginosa Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4354 |
預期用途
銅綠假單胞菌食物中毒的臨床表現(xiàn)有五種類型，即胃腸炎型、類霍亂型、類傷寒型、類感冒型和敗血癥型。本產(chǎn)品利用實時熒光定量PCR技術(shù)對銅綠假單胞菌感染在核酸水平上進行檢測，主要用于銅綠假單胞菌的定性篩查檢測。檢測結(jié)果僅供臨床參考，不單獨作為確診或排除病例的依據(jù)。
檢測原理
本試劑盒針對銅綠假單胞菌基因設計特異性引物和分子信標探針，在待檢樣本中含有銅綠假單胞菌 DNA的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應熒光信號進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
樣本要求
如使用原始標本進行檢測。標本（創(chuàng)面的滲出液、膿汁、穿刺液、尿、痰、腦脊液、血液、菌落、菌苔等）應為新鮮采集并使用雙蒸滅菌水或滅菌生理鹽水懸浮的原始標本。
如需在增菌后進行PCR檢測，則應使用選擇性增菌液對原始標本進行增菌。
標本收集后若不能立即檢測，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存，標本應凍存于-20℃～-80℃。
檢驗方法
試劑準備（試劑準備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當次實驗所需要的反應數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數(shù)
單反液配制表(每份)
PCR反應液（Taq酶+UNG酶）20μL
(3)在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
(4) 蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管和試劑盒中的DNA提取液轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。
2.樣本準備（樣本處理區(qū)）
DNA提取試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4.PCR（PCR擴增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定：
（1）陽性：標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
【檢驗結(jié)果的解釋】
通道及檢測結(jié)果
標本檢測結(jié)果解釋
FAM
陰性（－）
標本中未檢出銅綠假單胞菌
陽性（＋）
標本中檢測出銅綠假單胞菌
【檢驗方法的局限性】
當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的最低檢出限時可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。
本試劑盒僅供標本初步篩查使用，對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應進一步使用培養(yǎng)法進行確診。
【產(chǎn)品性能指標】 產(chǎn)品的最低檢出限為103 Copies/mL，產(chǎn)品CV值≤3%。
注意事項
整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
每次實驗應該設置陰、陽性對照。
為保證試劑不受標本污染，必須將DNA提取液、混合酶液及PCR反應液保存于試劑準備區(qū)。
試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
儀器擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
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