產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，專為大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）的核酸定量檢測(cè)設(shè)計(jì)，適用于科研用途。試劑盒包含優(yōu)化的引物-探針組合、陽(yáng)性對(duì)照及反應(yīng)體系，可實(shí)現(xiàn)高靈敏度（檢測(cè)下限達(dá)10拷貝/μL）和高特異性（避免與其他物種DNA交叉反應(yīng)）的檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 | 英文名稱 | Rat Brain-derived Neurotrophic Factor (BDNF) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類(lèi)型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4843 |
包裝組分
| 編號(hào) | 成分 | 規(guī)格 |
| 試劑一 | qPCR緩沖液 | 500 μL |
| 試劑二 | qPCR酶混合液 | 50 μL |
| 試劑三 | 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| 試劑四 | PCR引物-探針干粉 | 50次反應(yīng) |
| 試劑五 | 陽(yáng)性對(duì)照（10^7拷貝/μL） | 50 μL |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測(cè)適用）
稀釋陽(yáng)性對(duì)照：以10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照（10^1–10^6拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
標(biāo)記離心管：依次標(biāo)記6管（6至1號(hào)），每管加入45 μL稀釋液，逐級(jí)稀釋5 μL陽(yáng)性對(duì)照，渦旋混勻后冰上保存。
2. 樣本DNA制備
使用兼容的DNA提取試劑盒純化樣本，建議設(shè)置陰性對(duì)照（NC）和陽(yáng)性對(duì)照（PC）。
3. qPCR反應(yīng)體系（20 μL）
體系配置：按N+9管配置（N樣本+2對(duì)照+6標(biāo)準(zhǔn)曲線+1陰性對(duì)照）。
加樣順序：依次加入緩沖液、酶混合液、引物-探針、模板DNA（2 μL/管）。
4. 擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 10 min |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
| 循環(huán)擴(kuò)增 | 95℃ | 15 sec |
| （40循環(huán)） | 60℃ | 60 sec（采集FAM信號(hào)） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測(cè)：
陽(yáng)性：Ct ≤ 39，擴(kuò)增曲線典型；
陰性：Ct ≥ 40或無(wú)擴(kuò)增；
灰區(qū)（39<Ct<40）：需復(fù)測(cè)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域完成，避免交叉污染。
保存條件：試劑-20℃保存，避免反復(fù)凍融；運(yùn)輸需使用冰袋（2–8℃）。
質(zhì)量控制：
陰性對(duì)照Ct值應(yīng)≥40；
陽(yáng)性對(duì)照Ct值≤30且曲線呈S型。
局限性：
樣本質(zhì)量、提取方法及運(yùn)輸條件可能影響結(jié)果；
基因突變可能導(dǎo)致假陰性。
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關(guān)鍵字： 大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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