產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品為羊布氏桿菌(Brucella melitensis)探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，采用TaqMan探針技術(shù)，可對羊布氏桿菌核酸進行高靈敏度、高特異性的定性或定量檢測。本產(chǎn)品適用于科研用途，不用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 | 羊布氏桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Brucella melitensis (Sheep) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4888 |
產(chǎn)品規(guī)格
規(guī)格：50T/盒（50次20μL體系反應）
保存條件：-20℃避光保存
有效期：12個月
適用儀器：ABI7500、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR儀
產(chǎn)品組成
探針法qPCR緩沖液（500μL×1管）
探針法qPCR酶混合液（100μL×1管）
熒光PCR專用模板稀釋液（1mL×1管）
羊布氏桿菌探針法qPCR引物混合液（100μL×1管）
羊布氏桿菌qPCR探針（50μL×1管）
羊布氏桿菌探針法qPCR陽性對照（1×10?拷貝/μL，50μL×1管）
產(chǎn)品說明書（1份）
技術(shù)原理
本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù)，探針5'端標記熒光報告基團，3'端標記熒光淬滅基團并被磷酸化。在PCR擴增過程中，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割與靶序列結(jié)合的探針，使報告基團與淬滅基團分離并發(fā)出熒光信號，通過檢測熒光信號的增長實現(xiàn)對靶序列的定量分析。
產(chǎn)品特點
即開即用：用戶只需提供樣品DNA模板
高靈敏度：優(yōu)化的引物和探針設(shè)計，檢測下限可達102拷貝/μL
高特異性：引物針對羊布氏桿菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計，不與其它微生物發(fā)生交叉反應
雙重用途：既可用于定性檢測，也可用于定量檢測（線性范圍達5個數(shù)量級）
質(zhì)控完善：提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品
使用方法
標準曲線樣品制備（以102-10?拷貝/μL為例）
標記6個離心管為7、6、5、4、3、2
每管加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液
在7號管中加入5μL陽性對照（1×10?拷貝/μL），震蕩混勻，得1×10?拷貝/μL標準品
依次稀釋至6號管（1×10?拷貝/μL）、5號管（1×10?拷貝/μL）等，直至完成6個梯度稀釋
所有稀釋標準品置于冰上備用
樣品DNA制備
建議設(shè)置N+2個提取（N為樣品數(shù)，加1個陽性對照和1個陰性對照）
可使用本試劑盒配套裂解液直接作為PCR模板，或使用其他商業(yè)DNA提取試劑盒
PCR反應體系配制（20μL體系）
| 成分 | 樣品管(N+2) | 陰性對照 | 標準曲線管(6管) |
| qPCR緩沖液 | 各10μL | 10μL | 各10μL |
| 酶混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |
| 探針 | 各1μL | 1μL | 各1μL |
| 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |
| 樣品DNA | 各5μL | - | - |
| 超純水 | - | 5μL | - |
| 標準品 | - | - | 各5μL |
PCR擴增程序
預變性：95℃ 10分鐘
擴增循環(huán)（40個循環(huán)）：
95℃ 15秒
60℃ 1分鐘（采集FAM通道熒光信號）
結(jié)果分析
定量分析
以陽性對照濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸繪制標準曲線
根據(jù)樣品Ct值推算樣品DNA濃度
定性分析
陽性：Ct值≤35，且有典型擴增曲線
陰性：Ct值≥40或無擴增曲線
可疑：35<Ct值<40，需重復檢測確認
注意事項
實驗分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴增區(qū)），避免交叉污染
使用帶濾芯槍頭和專用工作服
陽性對照稀釋需在獨立區(qū)域進行
反應液應避光保存，避免反復凍融（不超過5次）
實驗后工作臺需用10%次氯酸或75%酒精消毒
所有廢棄物應按生物危害物處理
局限性說明
檢測結(jié)果受樣品采集、保存和處理方法影響
病原體基因突變可能導致假陰性
交叉污染可能導致假陽性
不同提取方法效率差異可能影響定量結(jié)果
公司正在出售的產(chǎn)品
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關(guān)鍵字： 羊布氏桿菌;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的產(chǎn)品品牌。
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