檢測原理
基于實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術，采用特異性探針法：
探針設計：5'端標記熒光報告基團（如FAM），3'端標記淬滅基團，探針與靶序列結合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號。
定量分析：通過監(jiān)測熒光信號增長（Ct值）與標準曲線比對，實現(xiàn)靶RNA的定性和定量檢測。
產品名稱 | 紫蘇葉探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Perilla frutescens (leaf) Probe-based PCR Identification Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR4895 |
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 | 功能 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL | 提供反應體系基礎環(huán)境 |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆轉錄酶、Taq酶等 |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL | 標準品稀釋及陰性對照 |
| 紫蘇葉引物-探針混合液 | 100μL | 特異性擴增靶序列 |
| 紫蘇葉qRT-PCR探針 | 50μL | 熒光標記探針 |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL | 標準曲線制備 |
| 說明書 | 1份 | 操作指南 |
實驗步驟
1. 標準曲線制備（6個梯度稀釋，102~10?拷貝/μL）
使用陽性對照按10倍梯度稀釋，避免交叉污染。
2. RNA提取
建議設置陰性對照（NC）和陽性對照（PC），推薦使用柱式RNA提取試劑。
3. qRT-PCR反應體系（20μL）
| 成分 | 體積 |
| qRT-PCR緩沖液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物-探針混合液 | 2μL |
| 探針 | 1μL |
| RNA模板 | 5μL |
4. 反應程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉錄 | 50℃ | 30 min |
| 預變性 | 94℃ | 10 min |
| PCR擴增（40循環(huán)） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣本濃度。
定性檢測：
陽性：Ct ≤ 35，擴增曲線呈S型；
可疑：35 < Ct < 40，需復測；
陰性：Ct ≥ 40或無擴增。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行，避免污染。
質量控制：陰性對照Ct應≥40，陽性對照Ct≤30。
重復性：可疑結果需重復檢測。
局限性：
基因突變可能導致假陰性；
交叉污染可能導致假陽性。
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關鍵字： 紫蘇葉;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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