豬偽狂犬病毒野毒株（gE基因）探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 豬偽狂犬病毒野毒株（gE基因）探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Pseudorabies Virus Wild Type Strain (gE gene) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4674 |
預(yù)期用途
用于定性或定量檢測(cè)豬偽狂犬病毒野毒株（gE基因），區(qū)分疫苗株與野毒感染，適用于科研及疫情監(jiān)測(cè)。
檢測(cè)原理
基于TaqMan探針?lè)?，靶向gE基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物及探針，通過(guò)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)擴(kuò)增分析。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/數(shù)量 | 說(shuō)明 |
| qPCR預(yù)混緩沖液 | 500 μL | 含dNTPs、Mg2?等反應(yīng)組分 |
| 熱啟動(dòng)Taq酶混合液 | 50 μL | 含探針?lè)▽?zhuān)用酶 |
| 熒光模板稀釋液 | 1 mL | 用于標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋 |
| 引物-探針干粉 | 50次反應(yīng)（20 μL體系） | 含gE基因特異性引物及FAM標(biāo)記探針 |
| 陽(yáng)性對(duì)照（非傳染性）| 50 μL（10?拷貝/μL） | 質(zhì)粒DNA或合成片段 |
| 陰性對(duì)照 | 40 μL | 滅菌純水 |
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備（定量檢測(cè)需6個(gè)梯度稀釋?zhuān)?01~10?拷貝/μL）：
使用專(zhuān)用稀釋液按10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照，避免交叉污染。
樣本DNA提取：
建議設(shè)置制備對(duì)照（PC/NC），推薦兼容市售DNA提取試劑盒。
qPCR反應(yīng)體系（20 μL）：
預(yù)混液15 μL + 模板DNA 5 μL，每個(gè)樣本設(shè)3復(fù)孔。
擴(kuò)增程序：
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 信號(hào)采集（FAM通道） |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 10 min | 否 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10 min | 否 |
| 擴(kuò)增循環(huán)（40×） | 95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec | 是 |
結(jié)果判讀
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣本拷貝數(shù)。
定性分析：
陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn)；
陽(yáng)性：Ct≤39且曲線(xiàn)呈典型S型；
灰區(qū)（39<Ct<40）：需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行。
防污染措施：使用帶濾芯槍頭，實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%乙醇消毒臺(tái)面。
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融（有效期12個(gè)月）。
適用范圍：僅限科研，不可用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 豬偽狂犬病毒野毒株（gE基因）;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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