產(chǎn)品原理

基于實時熒光定量PCR技術（探針法），通過Taq酶的5'核酸外切酶活性切割與靶序列結(jié)合的熒光標記探針。探針5'端標記報告基團（如FAM），3'端標記淬滅基團，擴增時探針被切割導致熒光信號釋放，通過檢測熒光強度實現(xiàn)定量/定性分析。

產(chǎn)品特點

高靈敏性：引物與探針針對元胡高度保守區(qū)設計，特異性強，無交叉反應。

即開即用：用戶僅需提供樣品RNA/DNA模板。

內(nèi)置對照：含陽性對照（無傳染性DNA片段，1×10^8拷貝/μL），便于區(qū)分假陰性。

雙重用途：支持定量檢測（線性范圍5-7個數(shù)量級）及定性分析。

試劑盒組成

| 成分 | 規(guī)格 |

| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |

| 酶混合液 | 100 μL |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100 μL |

| 熒光探針 | 50 μL |

| 陽性對照 | 50 μL (1×10^8拷貝/μL) |

| 說明書 | 1份 |

實驗步驟

1. 標準曲線制備（以10^1-10^7拷貝/μL為例）

標記6管，依次稀釋陽性對照（10倍梯度），冰上保存?zhèn)溆谩?/span>

2. 樣品制備

提取待測RNA/DNA（推薦柱式提取法），設置陰性/陽性對照。

3. PCR反應體系（20 μL/管）

| 成分 | 樣品管 | 陰性對照 | 標準曲線管 |

| qRT-PCR緩沖液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 熒光探針 | 1 μL | 1 μL | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 樣品模板 | 5 μL | - | - |

| 標準品稀釋液 | - | - | 5 μL |

| 超純水 | - | 5 μL | - |

4. 反應程序

| 步驟 | 溫度 | 時間 |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |

| 預變性 | 94℃ | 10 min |

| 擴增循環(huán)（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |

數(shù)據(jù)分析

定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣品濃度。

定性檢測：

陽性：Ct ≤ 35，擴增曲線明顯起峰；

陰性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需復測確認。

注意事項

操作需分區(qū)進行，避免污染。

僅限科研使用，不可用于臨床診斷。

試劑解凍后需充分混勻，避免反復凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品