技術(shù)原理
基于實時熒光定量PCR（qPCR）探針法：
探針設(shè)計：5'端標記熒光報告基團（如FAM），3'端標記淬滅基團，通過Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號。
定量分析：熒光強度與擴增產(chǎn)物量成正比，通過標準曲線計算起始模板濃度。
高特異性：引物及探針針對薏苡仁保守序列設(shè)計，避免交叉反應(yīng)。
產(chǎn)品名稱 | 薏苡仁探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Semen Coicis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4924 |
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/包裝 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL |
| 薏苡仁引物混合液 | 100μL |
| 薏苡仁探針 | 50μL |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
實驗步驟
1. 標準曲線制備（6個10倍梯度稀釋，10?~102拷貝/μL）：
使用專用稀釋液逐步稀釋陽性對照，避免交叉污染。
2. 樣品RNA提?。?/span>
推薦使用柱式RNA提取試劑盒，設(shè)置陽性（PC）和陰性對照（NC）。
3. qRT-PCR反應(yīng)體系（20μL）：
| 成分 | 體積（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA/DNA | 5 |
4. 反應(yīng)程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘
預(yù)變性：94℃ 10分鐘
擴增（40循環(huán)）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集FAM信號）
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以Ct值對標準曲線log濃度作圖，計算樣本濃度。
定性檢測：
陽性：Ct ≤ 35，典型擴增曲線；
陰性：Ct ≥ 40；
可疑結(jié)果（35<Ct<40）需復(fù)測。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行。
防污染：使用帶濾芯槍頭，定期清潔臺面（10%次氯酸或75%乙醇）。
保存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
質(zhì)量控制：每次實驗需包含陰/陽性對照。
公司正在出售的產(chǎn)品
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關(guān)鍵字： 薏苡仁;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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