大麥黃矮病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 大麥黃矮病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Barley Yellow Dwarf Virus Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4807 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)開發(fā)，專用于檢測(cè)大麥黃矮病毒（Barley Yellow Dwarf Virus, BYDV）的RNA。適用于科研領(lǐng)域，不可用于臨床診斷。產(chǎn)品具有高靈敏度、高特異性及寬線性范圍（5個(gè)數(shù)量級(jí)），可同時(shí)支持定性和定量分析。
產(chǎn)品信息
規(guī)格：50次反應(yīng)（20μL體系/次）
存儲(chǔ)條件：-20℃避光保存，未開封保質(zhì)期12個(gè)月。
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
試劑盒組成
預(yù)混液：含優(yōu)化引物、探針、dNTPs、酶等。
陽性對(duì)照：無傳染性DNA片段（1×10^8拷貝/μL）。
陰性對(duì)照：DEPC-H?O。
模板稀釋液：用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。
操作步驟
樣本制備
RNA提?。菏褂眉嫒莸暮怂崽崛≡噭┘兓瘶颖綬NA，建議設(shè)置陰性/陽性對(duì)照管。
標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋（定量分析需選）：
將陽性對(duì)照按10倍梯度稀釋（10^2~10^7拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
qPCR反應(yīng)設(shè)置
體系配制（20μL/反應(yīng)）：
預(yù)混液：18μL
模板：2μL（樣本/對(duì)照）
加樣順序：先陰性對(duì)照，再待測(cè)樣本，最后陽性對(duì)照。
擴(kuò)增程序
循環(huán)參數(shù)：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘（RT步驟）。
預(yù)變性：95℃ 5分鐘。
擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘，共40個(gè)循環(huán)。
熒光信號(hào)采集：設(shè)定于60℃延伸階段。
結(jié)果判讀
定量分析：
以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct值<35，S型擴(kuò)增曲線。
可疑：Ct值35~38，需復(fù)檢。
陰性：Ct值>38或無信號(hào)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本制備、試劑配制、擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
質(zhì)量控制：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰性/陽性對(duì)照。
樣本要求：RNA應(yīng)避免降解，建議液氮或Trizol保存。
局限性：僅限科研使用，結(jié)果需結(jié)合其他方法驗(yàn)證。
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關(guān)鍵字： 大麥黃矮病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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