檢測(cè)原理

本試劑盒基于探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，通過(guò)特異性探針（5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)）與靶序列結(jié)合。在擴(kuò)增過(guò)程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，使報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光信號(hào)。通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)鴨跖草RNA的定量及定性分析。

產(chǎn)品特點(diǎn)

高靈敏度：檢測(cè)限低至100拷貝/反應(yīng)。

高特異性：引物及探針針對(duì)鴨跖草高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，無(wú)交叉反應(yīng)。

即開即用：預(yù)混緩沖液、酶及引物探針混合物，僅需提供樣品RNA模板。

內(nèi)控設(shè)計(jì)：含陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL），可區(qū)分假陰性結(jié)果。

兼容性：適配常見RNA提取試劑盒（需自備）。

試劑盒組成

| 成分 | 規(guī)格 | 功能 |

| 探針?lè)╭RT-PCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |

| 探針?lè)╭RT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶等 |

| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL | 用于標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋 |

| 鴨跖草引物混合液 | 100μL | 特異性擴(kuò)增引物 |

| 鴨跖草qRT-PCR探針 | 50μL | 熒光標(biāo)記探針 |

| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL） | 50μL | 反應(yīng)體系質(zhì)控 |

| 說(shuō)明書 | 1份 | 操作指南 |

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

將陽(yáng)性對(duì)照按10倍梯度稀釋（10^2~10^7拷貝/μL），每個(gè)梯度獨(dú)立操作以避免污染。

2. RNA提取

使用自選方法提取樣品RNA，建議設(shè)置陰性對(duì)照（水）和陽(yáng)性對(duì)照（試劑盒提供）。

3. PCR反應(yīng)體系（20μL）

| 成分 | 樣品管 | 陰性對(duì)照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管 |

| qRT-PCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探針 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 樣品RNA | 5μL | - | - |

| 超純水 | - | 5μL | - |

| 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | - | - | 5μL |

4. 擴(kuò)增程序

| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 擴(kuò)增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信號(hào)） | 40 |

結(jié)果判讀

定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct值計(jì)算樣品拷貝數(shù)。

定性分析：

陽(yáng)性：Ct≤35，擴(kuò)增曲線呈S型。

可疑：35<Ct<40，需復(fù)測(cè)確認(rèn)。

陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線。

注意事項(xiàng)

操作全程需在無(wú)核酸污染環(huán)境下進(jìn)行，建議使用帶濾芯槍頭。

試劑解凍后需充分混勻，避免反復(fù)凍融。

陽(yáng)性對(duì)照需最后加入，防止氣溶膠污染。

本產(chǎn)品僅限科研用途。

公司正在出售的產(chǎn)品