產(chǎn)品概述

本試劑盒基于TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，專用于鴉膽子核酸的定性及定量檢測(cè)。通過(guò)針對(duì)鴉膽子高度保守基因區(qū)域設(shè)計(jì)的特異性引物和探針，結(jié)合熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，實(shí)現(xiàn)高靈敏性、高特異性的檢測(cè)。

適用范圍

科研用途（嚴(yán)禁用于臨床診斷或治療）。

適用于鴉膽子感染的輔助診斷研究。

檢驗(yàn)原理

探針?lè)ㄔ恚?/span>

探針5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。

PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)，信號(hào)強(qiáng)度與靶序列含量成正比。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：通過(guò)循環(huán)閾值（Ct值）與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，計(jì)算起始模板濃度。

試劑組成

| 成分 | 規(guī)格/用量 |

| qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100 μL |

| TaqMan探針 | 50 μL |

| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL） | 50 μL |

| 說(shuō)明書 | 1份 |

保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

使用陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行10倍梯度稀釋（102~10?拷貝/μL），每個(gè)梯度獨(dú)立操作以避免交叉污染。

2. 樣本處理

RNA提?。和扑]使用商業(yè)化病毒RNA提取試劑盒，提取后模板保存于-20℃。

陰性/陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰性對(duì)照（超純水）和陽(yáng)性對(duì)照（試劑盒提供）。

3. PCR反應(yīng)體系（20 μL）

| 成分 | 用量（μL） |

| qRT-PCR緩沖液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探針 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA | 5 |

4. 擴(kuò)增程序

| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 熒光采集 |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min | 否 |

| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min | 否 |

| 擴(kuò)增（40循環(huán)） | 94℃ | 15 sec | 否 |

| | 60℃ | 1 min | 是（FAM通道） |

結(jié)果判讀

定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。

定性分析：

陽(yáng)性：Ct值≤35，擴(kuò)增曲線呈典型S型。

陰性：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增。

灰區(qū)（35<Ct<40）：需復(fù)檢，復(fù)檢Ct<40判為陽(yáng)性。

注意事項(xiàng)

操作需分區(qū)（樣本處理區(qū)、試劑配制區(qū)、擴(kuò)增區(qū)）以避免污染。

反復(fù)凍融不超過(guò)7次，避免試劑失效。

僅限科研使用，臨床診斷需經(jīng)國(guó)家相關(guān)部門批準(zhǔn)。

公司正在出售的產(chǎn)品