產(chǎn)品概述
本試劑盒基于TaqMan探針法實時熒光定量PCR技術(shù)，專用于鴉膽子核酸的定性及定量檢測。通過針對鴉膽子高度保守基因區(qū)域設(shè)計的特異性引物和探針，結(jié)合熒光信號實時監(jiān)測，實現(xiàn)高靈敏性、高特異性的檢測。
適用范圍
科研用途（嚴禁用于臨床診斷或治療）。
適用于鴉膽子感染的輔助診斷研究。
產(chǎn)品名稱 | 鴉膽子探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Fructus Bruceae Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4928 |
檢驗原理
探針法原理：
探針5'端標記熒光報告基團，3'端標記淬滅基團。
PCR擴增時，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號，信號強度與靶序列含量成正比。
實時熒光定量PCR：通過循環(huán)閾值（Ct值）與標準曲線對比，計算起始模板濃度。
試劑組成
| 成分 | 規(guī)格/用量 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |
| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| 引物混合液 | 100 μL |
| TaqMan探針 | 50 μL |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50 μL |
| 說明書 | 1份 |
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月。
操作步驟
1. 標準曲線制備
使用陽性對照進行10倍梯度稀釋（102~10?拷貝/μL），每個梯度獨立操作以避免交叉污染。
2. 樣本處理
RNA提?。和扑]使用商業(yè)化病毒RNA提取試劑盒，提取后模板保存于-20℃。
陰性/陽性對照設(shè)置：每批次實驗需包含陰性對照（超純水）和陽性對照（試劑盒提供）。
3. PCR反應(yīng)體系（20 μL）
| 成分 | 用量（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA | 5 |
4. 擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 熒光采集 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min | 否 |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min | 否 |
| 擴增（40循環(huán)） | 94℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | 是（FAM通道） |
結(jié)果判讀
定量分析：以標準曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct值≤35，擴增曲線呈典型S型。
陰性：Ct值≥40或無擴增。
灰區(qū)（35<Ct<40）：需復(fù)檢，復(fù)檢Ct<40判為陽性。
注意事項
操作需分區(qū)（樣本處理區(qū)、試劑配制區(qū)、擴增區(qū)）以避免污染。
反復(fù)凍融不超過7次，避免試劑失效。
僅限科研使用，臨床診斷需經(jīng)國家相關(guān)部門批準。
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關(guān)鍵字： 鴉膽子;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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