產(chǎn)品概述

本試劑盒基于實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，采用特異性探針法（TaqMan?原理），專用于中藥材旋覆花（Inula japonica Thunb.） 的快速、高靈敏度分子鑒定。適用于藥材原料、飲片、提取物及成藥中旋覆花成分的真?zhèn)舞b別和物種溯源，可有效區(qū)分近緣種（如歐亞旋覆花 I. britannica）。

檢測原理

DNA提?。簭臉颖局刑崛』蚪MDNA。

特異性擴增：針對旋覆花ITS2基因片段設(shè)計特異性引物及TaqMan探針。

熒光檢測：探針5'端標記FAM熒光基團，3'端標記淬滅基團。PCR擴增時，探針被水解，釋放熒光信號，通過qPCR儀實時監(jiān)測，實現(xiàn)靶序列的定性與定量分析。

試劑盒組分

| 組分名稱 | 48 tests用量 | 儲存條件 |

| PCR預(yù)混液（含酶/dNTPs） | 1.2 mL | -20℃ |

| 旋覆花特異性引物探針混合液 | 200 μL | -20℃ |

| 陽性對照（旋覆花DNA） | 50 μL | -20℃ |

| 陰性對照（ddH?O） | 1 mL | 室溫 |

| DNA提取試劑（可選） | 1套 | 室溫 |

實驗流程

1. DNA提取

推薦使用配套植物基因組DNA提取試劑盒，或參照《中國藥典》2020年版通則（如硅膠膜柱法）。

2. PCR反應(yīng)體系配制（20 μL/反應(yīng)）

| 組分 | 體積 |

| PCR預(yù)混液 | 10 μL |

| 引物探針混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 2 μL (10-50 ng) |

| RNase-Free ddH?O | 補足至20 μL |

3. qPCR程序設(shè)置

| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | 信號采集 |

| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 擴增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

注：探針檢測通道：FAM，淬滅基團：BHQ-1。

結(jié)果判讀

陽性：Ct值 ≤ 35，且擴增曲線呈典型S型。

可疑：35 < Ct值 ≤ 40，建議重復(fù)實驗。

陰性：Ct值 > 40 或無擴增曲線。

驗證要求：

陽性對照：Ct值 ≤ 30

陰性對照：無擴增（Ct值 = Undetermined）

性能參數(shù)

| 項目 | 性能指標 |

| 特異性 | 不與I. britannica等近緣種交叉反應(yīng) |

| 靈敏度 | 可檢測≤1% (w/w) 的旋覆花摻偽 |

| 重復(fù)性 | CV < 5% (n=10) |

注意事項

實驗需在無菌環(huán)境（超凈臺）中進行，避免DNA污染。

提取DNA的OD260/280應(yīng)在1.7~2.0之間，降解樣本可能導致假陰性。

若檢測樣本為成藥，需去除干擾成分（如多糖、酚類）。

本試劑盒僅限科研使用，不用于臨床診斷。

應(yīng)用場景

中藥材GAP基地物種鑒定

藥品生產(chǎn)企業(yè)原料質(zhì)控

市場監(jiān)管部門打假抽樣

實驗室研究（如種質(zhì)資源分析）

公司正在出售的產(chǎn)品