產(chǎn)品原理
本試劑盒基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，采用探針法原理：
探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，通過Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號。
定量分析：熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比，通過Ct值（閾值循環(huán)數(shù)）實(shí)現(xiàn)續(xù)斷RNA的定量或定性檢測。
產(chǎn)品名稱 | 續(xù)斷探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Radix Dipsaci Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4933 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度與特異性：引物及探針針對續(xù)斷高度保守序列設(shè)計(jì)，避免交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液、酶及引物探針，用戶僅需提供RNA模板。
內(nèi)控設(shè)計(jì)：含陽性對照（1×10^8拷貝/μL），區(qū)分假陰性結(jié)果。
適用范圍：科研用途，不可用于臨床診斷。
試劑盒組成
| 編號 | 成分 | 規(guī)格 |
| 試劑一 | 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |
| 試劑二 | 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 試劑三 | 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL |
| 試劑四 | 續(xù)斷探針法qRT-PCR引物混合液 | 100 μL |
| 試劑五 | 續(xù)斷qRT-PCR探針 | 50 μL |
| 試劑六 | 續(xù)斷陽性對照（1×10^8拷貝/μL） | 50 μL |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將陽性對照按10倍梯度稀釋（10^2–10^7拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
2. RNA提取
自備樣品RNA，建議使用柱式提取法，確保純度（A260/A280≈2.0）。
3. qRT-PCR反應(yīng)（20 μL體系）
反應(yīng)體系：
緩沖液10 μL + 酶混合液2 μL + 探針1 μL + 引物混合液2 μL + RNA模板5 μL。
循環(huán)程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30 min → 預(yù)變性：94℃ 10 min → 擴(kuò)增（40循環(huán)）：94℃ 15 sec，60℃ 1 min（采集FAM信號）。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測：
陽性：Ct≤35，擴(kuò)增曲線呈S型；
陰性：Ct≥40或無擴(kuò)增；
可疑結(jié)果（35<Ct<40）需復(fù)測。
注意事項(xiàng)
操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，避免RNase污染。
試劑解凍后需充分混勻，避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)廢棄物需按生物安全規(guī)范處理。
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關(guān)鍵字： 續(xù)斷;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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