操作要點(diǎn)：

電泳條件?：使用15% SDS-PAGE凝膠，以提高對(duì)小分子量蛋白（~13.4 kDa）的分辨率。

?轉(zhuǎn)膜參數(shù)?：采用濕轉(zhuǎn)法，100 V、60–90分鐘（4°C），使用PVDF膜（需甲醇預(yù)活化）。

?抗體選擇?：

一抗：抗CST3多克隆抗體（如兔源抗體），推薦稀釋比為1:1000。

二抗：HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG，稀釋比1:10,000。

?顯色方式?：ECL化學(xué)發(fā)光法，預(yù)期條帶位于?~13.4 kDa?處。

?內(nèi)參建議?：由于CST3分子量較小，可選用GAPDH（~37 kDa）或β-actin（~42 kDa）作為內(nèi)參，避免條帶重疊。

產(chǎn)品概述：

Recombinant Human DREF（重組人DREF蛋白）是一種在大腸桿菌中表達(dá)的高純度重組蛋白，作為DNA復(fù)制相關(guān)元件結(jié)合因子，它在調(diào)控細(xì)胞增殖、DNA復(fù)制及基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮關(guān)鍵作用，是研究細(xì)胞周期調(diào)控及腫瘤發(fā)生機(jī)制的重要科研工具。

別名

Ac like transposable element, ALTE, BED type zinc finger domain containing protein 1, DNA replication related element binding factor, dREF homolog, hDREF, KIAA0785, Putative Ac like transposon, Putative Ac-like transposable element, TRAMP, ZBED1, ZBED1_HUMAN, Zinc finger BED domain-containing protein 1, Zinc finger BED type containing 1

宿主; E.Coli

表達(dá)區(qū)間; 3-100

分子量; 10.7 kDa

標(biāo)簽; N-terminal His Tag

純度; Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses

應(yīng)用; Western Blot, ELISA

性狀; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存儲(chǔ); The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.

 使用說明：

復(fù)溶方法?: 使用無菌蒸餾水或PBS緩沖液（pH 7.4）溶解凍干粉，輕輕混勻至完全溶解。

?應(yīng)用建議?:

?實(shí)驗(yàn)用途?: 適用于Western Blot、ELISA等檢測(cè)，作為抗原或標(biāo)準(zhǔn)品。

?濃度調(diào)整?: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求稀釋，避免高濃度導(dǎo)致非特異性結(jié)合。

?安全提示?: 操作時(shí)需佩戴手套和護(hù)目鏡，遵循實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)范。

重組表達(dá)原理：

基因克隆?：從牛基因組中獲取CST3基因的編碼序列（對(duì)應(yīng)氨基酸31–148），插入含有啟動(dòng)子、篩選標(biāo)記和His標(biāo)簽序列的質(zhì)粒載體。

?宿主表達(dá)?：將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E. coli（如BL21菌株），在IPTG誘導(dǎo)下啟動(dòng)蛋白表達(dá)。該系統(tǒng)成本低、表達(dá)效率高，適合大規(guī)模生產(chǎn)。

?蛋白純化?：利用His標(biāo)簽與鎳柱親和層析結(jié)合，實(shí)現(xiàn)高純度（>95%）蛋白回收，再經(jīng)透析或凝膠過濾去除雜質(zhì)。

?凍干保存?：加入海藻糖作為保護(hù)劑，凍干后可長期穩(wěn)定儲(chǔ)存，復(fù)溶后保持天然構(gòu)象和生物活性。

公司正在出售的產(chǎn)品：

重組蛋白生產(chǎn)流程：

通常包括以下幾個(gè)核心步驟：

基因克隆：首先，科學(xué)家需要獲取編碼目標(biāo)蛋白的特定基因序列（目的基因）。

構(gòu)建載體：將目的基因插入到一個(gè)被稱為“載體”的DNA分子中，這個(gè)載體就像是一個(gè)運(yùn)輸工具，

能將目的基因送入宿主細(xì)胞并指導(dǎo)其表達(dá)。

轉(zhuǎn)入宿主：將構(gòu)建好的重組載體導(dǎo)入選定的宿主細(xì)胞中，這個(gè)過程稱為“轉(zhuǎn)化”或“轉(zhuǎn)染”。

表達(dá)與培養(yǎng)：宿主細(xì)胞在適宜的條件下進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，其自身的遺傳系統(tǒng)會(huì)讀取重組載體上的基因信息，開始大量生產(chǎn)目標(biāo)蛋白。

純化：通過一系列復(fù)雜的生物化學(xué)方法（如層析技術(shù)），將目標(biāo)重組蛋白從宿主細(xì)胞的眾多混合物中分離出來，以獲得高純度的產(chǎn)品。