產(chǎn)品介紹：
登革熱病毒3型(DFV-III)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)是一種基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)開(kāi)發(fā)的高靈敏度、高特異性檢測(cè)工具，主要用于登革熱3型病毒的早期診斷和分型鑒定。該試劑盒通過(guò)針對(duì)登革病毒3型特異性基因區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，可有效區(qū)分DENV-1至DENV-4四種血清型，具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。
產(chǎn)品名稱 | 登革熱病毒3型(DFV-III)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 貨號(hào) | AP3888 |
產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光PCR | 規(guī)格 | 50T |
一、檢測(cè)原理與方法學(xué)
該試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)，針對(duì)登革病毒3型的特異性基因區(qū)域（如3'端非編碼區(qū)或E蛋白基因）設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針。當(dāng)樣本中存在登革病毒3型RNA時(shí)，逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，隨后在Taq酶作用下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，熒光探針在擴(kuò)增過(guò)程中被切割，釋放出熒光信號(hào)。通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)FAM通道的熒光信號(hào)變化，可實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒核酸的定性檢測(cè)。部分先進(jìn)試劑盒采用雙通道設(shè)計(jì)，其中FAM通道用于檢測(cè)目標(biāo)基因，而HEX通道則用于檢測(cè)人RNase P基因等內(nèi)參，以監(jiān)控采樣質(zhì)量和核酸提取效率。
二、產(chǎn)品性能特點(diǎn)
性能指標(biāo) 說(shuō)明
檢測(cè)方法 熒光RT-PCR法（探針?lè)ǎ?/span>
靈敏度 最低檢出限為103 Copies/mL，CV值≤3%
特異性 針對(duì)DENV-3型，與其他血清型及常見(jiàn)病原體無(wú)交叉反應(yīng)
檢測(cè)時(shí)間 全程約1-2小時(shí)（含核酸提?。?/span>
保存條件 -20℃±5℃避光保存，有效期通常為6-12個(gè)月
適用儀器 ABI系列、Bio-Rad系列、Roche LightCycler等熒光定量PCR儀
三、試劑盒組成與操作流程
主要組分
反應(yīng)體系：含DENV-3特異性引物、探針、RT-PCR buffer、Taq酶、RT酶
質(zhì)控品：陽(yáng)性質(zhì)控品（含DENV-3 RNA或重組質(zhì)粒）、陰性質(zhì)控品
操作步驟
輔助試劑：核酸提取液、焦碳酸二乙酯處理水（DEPC水）
操作步驟
樣本采集與處理：采集血清、血漿或全血樣本，使用核酸提取試劑盒提取RNA
反應(yīng)體系配置：將提取的RNA與反應(yīng)液、酶液按比例混合（通常為20μL體系）
PCR擴(kuò)增：在熒光定量PCR儀上運(yùn)行程序：
預(yù)變性：95℃ 5-10分鐘
循環(huán)階段：95℃ 15秒 → 57-60℃ 15-60秒（40個(gè)循環(huán)）
結(jié)果分析：根據(jù)Ct值和擴(kuò)增曲線形態(tài)判斷結(jié)果
四、結(jié)果判讀與注意事項(xiàng)
判讀標(biāo)準(zhǔn)
陽(yáng)性：Ct值≤35且擴(kuò)增曲線呈典型S型
可疑：35<Ct值≤38，建議重復(fù)檢測(cè)
陰性：Ct值>38或無(wú)Ct值
無(wú)效：陰性對(duì)照出現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)信號(hào)
關(guān)鍵注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：必須在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)分別操作，避免交叉污染
樣本質(zhì)量：樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，采集后應(yīng)盡快檢測(cè)或-70℃保存
參數(shù)設(shè)置：熒光通道選擇FAM，淬滅通道選擇NONE；ABI系列儀器不選ROX校正
質(zhì)控要求：每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照，確保結(jié)果可靠性
污染防控：使用帶濾芯吸頭，實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精處理工作臺(tái)
五、臨床應(yīng)用與局限性
臨床應(yīng)用價(jià)值
早期診斷：在發(fā)病早期（≤3天）靈敏度高達(dá)96.8%，可快速檢測(cè)DENV-3感染
血清分型：有效區(qū)分DENV-1至DENV-4四種血清型，對(duì)流行病學(xué)監(jiān)測(cè)至關(guān)重要
疫情監(jiān)測(cè)：用于登革熱流行期間的疫情監(jiān)測(cè)和暴發(fā)調(diào)查
重癥預(yù)警：DENV-3感染與重癥登革熱相關(guān)，早期檢測(cè)有助于及時(shí)干預(yù)
局限性
無(wú)法區(qū)分感染階段：核酸陽(yáng)性僅表示存在病毒，不能區(qū)分急性感染或既往感染
可能出現(xiàn)假陰性：在恢復(fù)期（>3天）靈敏度降至53.3%，與病毒載量下降相關(guān)
血清型特異性：不同血清型之間存在基因差異，引物設(shè)計(jì)需針對(duì)特定血清型，可能存在地區(qū)流行株匹配度問(wèn)題
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注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范
嚴(yán)格分區(qū)操作：試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)需物理隔離，防止氣溶膠污染。
每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照（無(wú)模板DNA）、陽(yáng)性對(duì)照（已知PAT基因樣本）及空白對(duì)照（僅緩沖液）。
加樣時(shí)避免過(guò)量或不足，推薦低容量反應(yīng)管以提高熱傳導(dǎo)率。
污染防控
定期監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室空氣、加樣槍及儀器表面污染，可通過(guò)擦拭采樣后擴(kuò)增驗(yàn)證。
擴(kuò)增產(chǎn)物需在專用區(qū)域處理，避免開(kāi)蓋時(shí)形成氣溶膠污染。
關(guān)鍵字： 登革熱病毒3型 ;DFV-III; 熒光PCR法;核酸檢測(cè)試劑盒;
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、 華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。
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