產(chǎn)品介紹：
轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動(dòng)子核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)是一種基于TaqMan探針技術(shù)的高特異性檢測(cè)工具，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)實(shí)現(xiàn)對(duì)食品、飼料及農(nóng)產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因植物成分的精準(zhǔn)鑒定。該試劑盒以花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子(CaMV35S)為靶標(biāo)，檢出限可達(dá)0.1%，廣泛應(yīng)用于食品安全監(jiān)管、農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易及科研領(lǐng)域，是當(dāng)前轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)的核心技術(shù)手段之一。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動(dòng)子核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法) | 貨號(hào) | AP3928 |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR | 規(guī)格 | 50T |
一、檢測(cè)原理與技術(shù)特點(diǎn)
該試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)CaMV35S啟動(dòng)子保守序列設(shè)計(jì)特異性引物與FAM標(biāo)記的TaqMan探針。在PCR擴(kuò)增過程中，當(dāng)探針與目標(biāo)DNA序列結(jié)合后，聚合酶在延伸時(shí)會(huì)降解探針，釋放出熒光信號(hào)，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度變化，可實(shí)現(xiàn)對(duì)CaMV35S啟動(dòng)子的特異性檢測(cè)。該方法具有高靈敏度（可檢出103 copies/mL樣本）、高特異性（種屬特異性達(dá)100%）和高重現(xiàn)性（經(jīng)多批次驗(yàn)證）的特點(diǎn)。部分試劑盒采用優(yōu)化的反應(yīng)體系，使得檢測(cè)靈敏度可達(dá)1-10 CFU/mL，遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)檢測(cè)方法。
二、產(chǎn)品性能與規(guī)格參數(shù)
性能指標(biāo) 參數(shù)說明
檢測(cè)方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法（TaqMan探針法）
檢測(cè)限 通常為0.1%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），部分產(chǎn)品可達(dá)103 copies/mL
特異性 專一性檢測(cè)CaMV35S啟動(dòng)子，與其他植物基因組無(wú)交叉反應(yīng)
規(guī)格 48T/盒、50T/盒（不同品牌規(guī)格略有差異）
保存條件 -20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤5次）
有效期 6-12個(gè)月（不同品牌存在差異）
適用儀器 ABI 7500、CFX 96、Roche LightCycler 480等熒光定量PCR儀
三、操作流程與結(jié)果判讀
核心操作步驟
樣本處理：稱取200g植物樣本，參照《GB/T 19495.3-2004》提取DNA，短期-20℃保存，長(zhǎng)期-70℃保存（≤6個(gè)月）
添加模板：在模板添加區(qū)（第二區(qū)）向每管加入5μL DNA模板，順序?yàn)殛幮詫?duì)照、待測(cè)樣品、陽(yáng)性對(duì)照
試劑配制：在試劑準(zhǔn)備區(qū)（第一區(qū)）將反應(yīng)液與酶液按比例混合，分裝至PCR反應(yīng)管，全程置于冰盒中操作
添加模板：在模板添加區(qū)（第二區(qū)）向每管加入5μL DNA模板，順序?yàn)殛幮詫?duì)照、待測(cè)樣品、陽(yáng)性對(duì)照
擴(kuò)增反應(yīng)：使用熒光定量PCR儀，設(shè)置基線循環(huán)6-15，閾值設(shè)為超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線最高點(diǎn)35
推薦PCR擴(kuò)增程序
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 1 cycle 95℃ 10 min
變性 40 cycles 95℃ 15 sec
退火/延伸 40 cycles 60℃ 60 sec
結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)
陽(yáng)性：Ct值≤36，擴(kuò)增曲線呈典型"S"型
陰性：Ct值≥40或無(wú)Ct值，曲線為直線或輕微斜線
可疑樣品：36<Ct值<40，需重新抽提核酸進(jìn)行驗(yàn)證
無(wú)效檢測(cè)：陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增曲線或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增曲線3
四、應(yīng)用場(chǎng)景與質(zhì)量控制
主要應(yīng)用場(chǎng)景
食品安全監(jiān)管：檢測(cè)食品中是否含有未經(jīng)授權(quán)的轉(zhuǎn)基因成分，保障消費(fèi)者知情權(quán)
農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易：滿足國(guó)際貿(mào)易中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)識(shí)要求（如歐盟規(guī)定>0.5%需標(biāo)識(shí)）
科研研究：轉(zhuǎn)基因植物安全性評(píng)價(jià)、基因表達(dá)研究及檢測(cè)方法開發(fā)
進(jìn)出口檢驗(yàn)：海關(guān)對(duì)進(jìn)出境轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的符合性檢測(cè)與抽查檢測(cè)15
質(zhì)量控制要點(diǎn)
必須設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照：每次實(shí)驗(yàn)需包含陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(PTC)
嚴(yán)格分區(qū)操作：至少分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、模板添加區(qū)、擴(kuò)增區(qū)，避免交叉污染
使用無(wú)核酸酶耗材：采用帶濾芯吸頭，不同區(qū)域使用獨(dú)立工具，實(shí)驗(yàn)前后用10%次氯酸鈉溶液處理工作臺(tái)
樣本保存：避免反復(fù)凍融，運(yùn)輸時(shí)2-8℃冰袋保存
五、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)與注意事項(xiàng)
現(xiàn)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)
GB/T 38505-2020《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品通用檢測(cè)方法》，規(guī)定了核酸提取、目標(biāo)基因擴(kuò)增等核心檢測(cè)環(huán)節(jié)的操作規(guī)范，其方法的最低檢出限為0.1%
GB/T 19495.3-2004《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 核酸提取純化方法》
GB/T 19495.7-2004《轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) 抽樣和制樣方法》
公司正在出售的產(chǎn)品：
富含脯氨酸蛋白24抗體 | Folate Receptor 4 葉酸受體4抗體 |
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注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范
嚴(yán)格分區(qū)操作：試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)需物理隔離，防止氣溶膠污染。
每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照（無(wú)模板DNA）、陽(yáng)性對(duì)照（已知PAT基因樣本）及空白對(duì)照（僅緩沖液）。
加樣時(shí)避免過量或不足，推薦低容量反應(yīng)管以提高熱傳導(dǎo)率。
污染防控
定期監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室空氣、加樣槍及儀器表面污染，可通過擦拭采樣后擴(kuò)增驗(yàn)證。
擴(kuò)增產(chǎn)物需在專用區(qū)域處理，避免開蓋時(shí)形成氣溶膠污染。
關(guān)鍵字： 轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動(dòng)子 ; 熒光PCR法;核酸檢測(cè)試劑盒;
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、 華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。
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