產品介紹：

豬細小病毒/豬圓環(huán)病毒2型（PPV/PCV-2）核酸檢測試劑盒（雙重熒光PCR法）是一種用于獸醫(yī)臨床診斷的分子生物學工具。該試劑盒能夠在一個反應管內同時檢測并區(qū)分兩種對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴重的病毒：豬細小病毒（Porcine Parvovirus, PPV）和豬圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus Type 2, PCV-2）。

這兩種病毒常引起母豬繁殖障礙（如流產、死胎）和仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征，且常發(fā)生混合感染。本試劑盒通過雙重熒光PCR技術，實現了對這兩種病原體的高效、精準鑒別診斷。

該試劑盒基于雙重實時熒光定量PCR（Dual-color qPCR）技術，采用TaqMan探針法原理。

檢測靶標：

豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）：針對其保守的Cap基因（衣殼蛋白基因）或Rep基因（復制相關蛋白基因）設計特異性引物和探針。PCV-2是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的主要病原。

豬細小病毒（PPV）：針對其保守的VP2基因（主要衣殼蛋白基因）設計特異性引物和探針。PPV是引起母豬繁殖障礙（如產木乃伊胎、死胎）的主要病原之一。

熒光標記與通道：

FAM通道：通常用于檢測PCV-2，探針標記FAM熒光基團。

HEX/VIC通道：通常用于檢測PPV，探針標記HEX或VIC熒光基團。

通過不同的熒光信號，儀器可以在同一反應體系中同時識別兩種病毒的擴增情況。

核心優(yōu)勢：

雙重檢測，高效鑒別：一次實驗即可同時檢出PCV-2和PPV，有效區(qū)分單一感染與混合感染，避免漏診，提高檢測效率。

高特異性：引物和探針經過精心設計，只擴增目標病毒，與豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬偽狂犬病毒（PRV）等其他豬源常見病原無交叉反應。

高靈敏度：檢測靈敏度極高，最低檢出限可達到 102 - 103 copies/mL，能夠有效檢出樣本中微量的病毒核酸。

操作簡便：采用預混液形式，減少了移液步驟和污染風險。

市面上的試劑盒規(guī)格通常為 50次/盒 (50T)。

規(guī)格與成分

市面上的試劑盒規(guī)格通常為 50次/盒 (50T)。

一個完整的試劑盒通常包含以下組分：

組分名稱  規(guī)格/描述  作用

qPCR預混液 (Master Mix)  50T x 2管  含Taq酶、dNTPs、緩沖液及UNG酶（防污染體系）

雙重引物/探針混合液  50T x 1管  含FAM標記的PCV-2探針 + HEX標記的PPV探針

陽性對照 (Positive Control)  50T x 1管  含PCV-2和PPV目標片段的質?；旌衔铮ㄍǔ?×10? copies/μL）

陰性對照 (Negative Control)  50T x 1管  無核酸酶水，用于監(jiān)控反應體系是否存在污染

核酸提取試劑 (部分含)  可選  用于從組織、血液或糞便中提取病毒DNA

使用方法

標準操作流程遵循分子生物學實驗規(guī)范：

樣本采集與處理：

采集樣本：采集豬的流產胎兒、死胎、木乃伊胎組織（如肺、腎、脾），或母豬血液、精液等。

處理方法：組織樣本需進行勻漿處理，血液樣本需分離血清或提取全血DNA。

DNA提?。?/span>

使用商業(yè)化的病毒DNA提取試劑盒（如磁珠法或離心柱法）提取樣本中的總DNA。

反應體系配置：

按說明書比例混合預混液、引物探針混合液。

分裝至PCR反應管，每管加入提取的DNA模板（通常為5-10μL）。

上機擴增：

儀器設置：在ABI 7500、Roche LightCycler 480等熒光定量PCR儀上運行。

反應程序（參考）：

預變性：95℃ 5分鐘

循環(huán)階段（40-45個循環(huán)）：95℃ 15秒 → 60℃ 30-60秒（采集熒光）

結果判讀：

PCV-2陽性：FAM通道出現典型的“S”型擴增曲線，且Ct值 ≤ 閾值（如35-38）。

PPV陽性：HEX/VIC通道出現典型的“S”型擴增曲線，且Ct值 ≤ 閾值。

雙重陽性：FAM和HEX兩個通道均出現陽性擴增曲線。

陰性：兩個通道均無擴增曲線或Ct值為“Undet”（未檢測到）。

注意事項

保存條件：試劑盒需在 -20℃避光 條件下保存，有效期通常為12個月。避免反復凍融，尤其是酶制劑和陽性對照。

適用范圍：該產品僅供獸醫(yī)診斷、科研或工業(yè)檢測使用，不可用于臨床醫(yī)療。

生物安全：處理病豬樣本時需在生物安全二級（BSL-2）實驗室進行，穿戴防護裝備，防止感染。

防污染：PCR實驗極易受污染，必須嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯的槍頭，防止擴增產物污染導致假陽性。

方法優(yōu)勢

相較于傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)法（耗時長、生物安全要求極高）或血清學檢測（窗口期長），熒光PCR法具有顯著優(yōu)勢：

高特異性： 通過針對鼠疫桿菌特異性基因（如caf1、pla）設計的引物和探針，能夠精準識別目標菌，有效區(qū)分近緣菌種（如假結核耶爾森氏菌），避免假陽性。

高靈敏度： 檢測靈敏度極高（部分產品最低檢測限可達1-10 CFU/mL或10-100拷貝/毫升），有助于在感染早期、菌血癥含量較低或樣本經過抗生素治療后做出準確判斷。

快速高效： 從樣本DNA提取到出結果通常在數小時內完成，遠快于傳統(tǒng)培養(yǎng)法（通常需要數天），適合在突發(fā)公共衛(wèi)生事件中對大量樣本進行快速篩查。

安全便捷： 采用閉管檢測模式，擴增后無需開蓋處理，大大降低了擴增產物污染和操作人員接觸高致病性病原體的風險。部分試劑盒采用預混凍干技術，便于試劑的儲存和運輸。

公司正在出售的產品：

質量控制與常見問題：

污染防控：

分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯吸頭。

實驗后用10%次氯酸或紫外燈清潔工作臺。

假陰性處理：

檢查樣本抑制物（如使用內標基因）。

試劑保存：

-20℃避光保存，避免反復凍融。