產(chǎn)品介紹：
禽流感病毒通用型/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）核酸檢測(cè)試劑盒（雙重?zé)晒釶CR法）是一種用于定性檢測(cè)樣本中是否存在禽流感病毒（AIV）的分子生物學(xué)產(chǎn)品。該試劑盒采用雙重?zé)晒釶CR技術(shù)，能夠在同一反應(yīng)中同步完成對(duì)所有亞型禽流感病毒的通用篩查和對(duì)H5亞型的特異性分型鑒定。
禽流感是嚴(yán)重危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的烈性傳染病，其中H5亞型多為高致病性毒株。該試劑盒通過“通用檢測(cè)+亞型分型”的策略，既能確認(rèn)是否感染禽流感病毒，又能快速判斷是否為高風(fēng)險(xiǎn)的H5亞型，為禽流感的早期診斷、快速分型及疫情精準(zhǔn)防控提供關(guān)鍵技術(shù)支持。
產(chǎn)品名稱 | 禽流感病毒通用型/H5亞型（AIV-U/AIV-H5）核酸檢測(cè)試劑盒 (雙重?zé)晒釶CR法) |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR |
規(guī)格 | 50T |
貨號(hào) | AP3976 |
基本原理
該試劑盒的核心原理是雙重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR（Multiplex qRT-PCR），具體流程如下：
RNA提?。簭拇郎y(cè)樣品（如咽喉拭子、組織勻漿等）中提取總RNA。
逆轉(zhuǎn)錄與雙重PCR擴(kuò)增：利用針對(duì)禽流感病毒M基因（通用檢測(cè)靶標(biāo)）和H5亞型HA基因（分型檢測(cè)靶標(biāo)）設(shè)計(jì)的特異性引物和熒光標(biāo)記的探針（如FAM和HEX/VIC標(biāo)記），在同一個(gè)反應(yīng)管中同步進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增。
內(nèi)標(biāo)（IC）質(zhì)控：試劑盒包含一個(gè)內(nèi)標(biāo)（Internal Control）系統(tǒng)（如ROX通道）。內(nèi)標(biāo)用于全程監(jiān)控樣本采集、核酸提取、逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增過程是否成功，有效防止因操作失誤或樣本中存在抑制物導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。
實(shí)時(shí)檢測(cè)與判讀：在擴(kuò)增過程中，隨著病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄生成的cDNA片段指數(shù)級(jí)增加，對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)也隨之增強(qiáng)。儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)各通道的熒光信號(hào)，根據(jù)擴(kuò)增曲線和設(shè)定的閾值（Ct值）判定結(jié)果。
檢測(cè)靶標(biāo)與特異性
靶標(biāo)基因：
通用型檢測(cè)（AIV-U）：靶向禽流感病毒M基因（基質(zhì)蛋白基因）的保守區(qū)域。該區(qū)域在所有A型流感病毒（涵蓋H1-H16和N1-N9所有亞型）中高度保守，因此可作為通用標(biāo)志檢測(cè)所有亞型的禽流感病毒。
H5亞型檢測(cè)（AIV-H5）：靶向H5亞型禽流感病毒的HA基因（血凝素基因）特異性區(qū)域，確保只檢測(cè)H5亞型，與其他亞型（如H7、H9）無交叉反應(yīng)。
高特異性：該方法能特異性地檢測(cè)禽流感病毒并準(zhǔn)確分型H5亞型，與新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒等其他常見禽類病原體無交叉反應(yīng)。
靈敏度：檢測(cè)下限通常可達(dá) 1×103 copies/mL，能有效檢出樣品中微量的病毒核酸。
標(biāo)本類型與處理
拭子樣本：禽類的咽喉拭子、泄殖腔拭子。
標(biāo)本類型：
拭子樣本：禽類的咽喉拭子、泄殖腔拭子。
組織樣本：疑似病禽的肺臟、脾臟、氣管、法氏囊等組織。
環(huán)境樣本：養(yǎng)殖場(chǎng)、活禽市場(chǎng)的糞便、飲水、飼料等環(huán)境樣本。
樣本處理：
拭子：將拭子放入病毒保存液中，充分震蕩洗滌后取上清液提取RNA。
組織：取適量組織加入生理鹽水，使用組織研磨儀制成勻漿，取上清液提取RNA。
注意：樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，提取后的RNA建議立即檢測(cè)或在-80℃保存。
應(yīng)用價(jià)值
該雙重檢測(cè)試劑盒在禽流感防控體系中具有重要的應(yīng)用價(jià)值：
快速篩查與精準(zhǔn)分型：一次檢測(cè)即可完成“是否感染禽流感”和“是否為H5亞型”的雙重判定，大大提高了檢測(cè)效率，縮短了確診時(shí)間。
臨床輔助診斷：對(duì)于出現(xiàn)呼吸道癥狀、產(chǎn)蛋率下降或突發(fā)死亡的禽群，快速明確病因。
疫情監(jiān)測(cè)與流調(diào)：用于養(yǎng)殖場(chǎng)、活禽交易市場(chǎng)及野鳥棲息地的常態(tài)化監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)H5亞型病毒的流行蹤跡。
疫苗免疫效果評(píng)估：配合疫苗免疫計(jì)劃，監(jiān)測(cè)環(huán)境中野毒的感染壓力。
?? 優(yōu)勢(shì)與局限性
優(yōu)勢(shì)
一管雙檢，效率高：?jiǎn)喂茈p重檢測(cè)，同步完成通用篩查和H5分型，節(jié)省樣本、試劑和時(shí)間成本。
雙重質(zhì)控，結(jié)果可靠：內(nèi)標(biāo)（IC）系統(tǒng)的設(shè)置確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，有效避免了假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。
高靈敏度與特異性：能夠檢出極微量的病毒核酸，并準(zhǔn)確區(qū)分H5亞型與其他亞型。
快速高效：整個(gè)RT-PCR過程（不含RNA提?。┩ǔＴ?.5-2小時(shí)內(nèi)完成。
局限性
無法區(qū)分死/活病毒：檢測(cè)出陽(yáng)性僅表明樣品中含有病毒RNA，但無法確定病毒是否具有感染性（活病毒）。
實(shí)驗(yàn)室要求高：需要具備熒光定量PCR儀和專業(yè)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室（分區(qū)操作），以防止氣溶膠污染。
RNA穩(wěn)定性：病毒RNA極易降解，對(duì)樣本的采集、運(yùn)輸和保存條件要求較高（需冷鏈運(yùn)輸，-80℃保存）。
核心優(yōu)勢(shì)與技術(shù)要點(diǎn)：
高特異性
引物設(shè)計(jì)基于目標(biāo)基因保守區(qū)域，可區(qū)分高度同源序列（如病毒變異株）。
高靈敏度
檢測(cè)限低至10拷貝/反應(yīng)，適用于微量樣本。
高效擴(kuò)增
熱啟動(dòng)酶（如HotStarTaq）減少非特異性擴(kuò)增，30分鐘內(nèi)完成40個(gè)循環(huán)。
防污染設(shè)計(jì)
UNG酶系統(tǒng)降解殘留產(chǎn)物，避免交叉污染。
穩(wěn)定性提升
凍干預(yù)混技術(shù)實(shí)現(xiàn)常溫運(yùn)輸，操作便捷。
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注意事項(xiàng)：
防污染操作
需在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)獨(dú)立操作，使用帶濾芯吸頭及專用實(shí)驗(yàn)服。
陽(yáng)性對(duì)照管理
濃度高達(dá)1×10?拷貝/μL，需單獨(dú)存放并避免污染其他試劑。
局限性
僅限科研使用，不可用于臨床診斷；
環(huán)境樣本中可能存在PCR抑制劑，需設(shè)置內(nèi)參對(duì)照。
關(guān)鍵字： 禽流感病毒通用型/H5亞型 ;AIV-U/AIV-H5 ;雙重?zé)晒釶CR法;核酸檢測(cè)試劑盒;
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、 華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。
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