產(chǎn)品介紹：
豬瘟/高致病性豬藍耳病病毒（CSFV/PRRSV-M）核酸檢測試劑盒（雙重熒光PCR法）是一種用于獸醫(yī)臨床診斷的分子生物學工具。該試劑盒能夠在一個反應(yīng)體系中同時檢測并區(qū)分兩種對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴重的病毒：豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV-M）。
產(chǎn)品名稱 | 豬瘟/高致病性豬藍耳病病毒(CSFV/PRRSV-M)核酸檢測試劑盒(雙重熒光PCR法) |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | AP3985 |
這兩種病毒常引起豬群高熱、繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)疾病，且臨床癥狀相似，易發(fā)生混合感染。本試劑盒通過雙重熒光PCR技術(shù)，實現(xiàn)了對這兩種重大疫病的高效、精準鑒別診斷。
該試劑盒基于雙重實時熒光定量PCR（Dual-color qPCR）技術(shù)，采用TaqMan探針法原理，通過一步法RT-qPCR（反轉(zhuǎn)錄-定量PCR）同步檢測兩種病毒的RNA。
檢測靶標：
豬瘟病毒 (CSFV)：針對其基因組中的保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，通常是5'非翻譯區(qū) (5'UTR) 或 NS5B基因。CSFV可引起豬瘟，導(dǎo)致高熱、出血性病變和高死亡率。
高致病性豬藍耳病病毒 (PRRSV-M)：針對其特征性變異區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，通常是Nsp2基因的缺失變異區(qū)或ORF7基因。PRRSV-M株可引起高致病性藍耳病，導(dǎo)致母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病。
熒光標記與通道：
FAM通道：通常用于檢測CSFV，探針標記FAM熒光基團。
HEX/VIC通道：通常用于檢測PRRSV-M，探針標記HEX或VIC熒光基團。
部分試劑盒還會設(shè)置內(nèi)參基因（如豬RNase P基因，標記Cy5通道），用于監(jiān)控樣本采集、核酸提取及PCR擴增是否正常，防止假陰性。
核心優(yōu)勢：
雙重檢測，高效鑒別：一次實驗即可同時檢出CSFV和PRRSV-M，有效區(qū)分單一感染與混合感染，避免漏診，指導(dǎo)精準防控。
高特異性：引物和探針經(jīng)過精心設(shè)計，只擴增目標病毒，與豬圓環(huán)病毒（PCV）、偽狂犬病毒（PRV）等其他豬源常見病原無交叉反應(yīng)。
高靈敏度：檢測靈敏度極高，最低檢出限可達到 1×103 copies/mL，能夠有效檢出樣本中微量的病毒核酸。
快速便捷：采用一步法RT-qPCR，無需RNA提取后更換酶，減少操作步驟和污染風險；全程檢測時間約1-2小時。
市面上的試劑盒規(guī)格通常為 50次/盒 (50T)。
規(guī)格與成分
市面上的試劑盒規(guī)格通常為 50次/盒 (50T)。
一個完整的試劑盒通常包含以下組分：
組分名稱 規(guī)格/描述 作用
qRT-PCR預(yù)混液 (Master Mix) 含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶、dNTPs、緩沖液 提供RT-PCR反應(yīng)所需的核心酶和底物
雙重引物/探針混合物 含F(xiàn)AM標記的CSFV探針 + HEX標記的PRRSV-M探針 特異性識別并擴增目標病毒序列
陽性對照 (Positive Control) 含CSFV和PRRSV-M目標基因片段的質(zhì)粒混合物 用于驗證試劑盒的有效性
陰性對照 (Negative Control) 無核酸酶水 用于監(jiān)控反應(yīng)體系是否存在污染
使用方法
標準操作流程遵循分子生物學實驗規(guī)范：
樣本采集與處理：
采集樣本：采集豬的全血（抗凝）、血清、脾臟、淋巴結(jié)、肺臟等組織。
處理方法：組織樣本需進行勻漿處理，全血或血清樣本可直接提取RNA。
RNA提?。?/span>
使用商業(yè)化的病毒RNA提取試劑盒（如磁珠法或離心柱法）提取樣本中的總RNA。
反應(yīng)體系配置：
按說明書比例混合預(yù)混液、引物探針混合液。
分裝至PCR反應(yīng)管，每管加入提取的RNA模板（通常為5-10μL）。
上機擴增：
儀器設(shè)置：在ABI 7500、Roche LightCycler 480等熒光定量PCR儀上運行。
反應(yīng)程序（參考）：
逆轉(zhuǎn)錄：42-50℃ 10-30分鐘
預(yù)變性：95℃ 3-10分鐘
循環(huán)階段（40-45個循環(huán)）：95℃ 15秒 → 55-60℃ 30-60秒（采集熒光）
結(jié)果判讀：
CSFV陽性：FAM通道出現(xiàn)典型的“S”型擴增曲線，且Ct值 ≤ 閾值（如35-40）。
PRRSV-M陽性：HEX/VIC通道出現(xiàn)典型的“S”型擴增曲線，且Ct值 ≤ 閾值。
雙重陽性：FAM和HEX兩個通道均出現(xiàn)陽性擴增曲線。
陰性：兩個通道均無擴增曲線或Ct值為“Undet”（未檢測到）。
注意事項
保存條件：試劑盒需在 -20℃避光 條件下保存，有效期通常為12個月。避免反復(fù)凍融，尤其是酶制劑和陽性對照。
適用范圍：該產(chǎn)品僅供獸醫(yī)診斷、科研或工業(yè)檢測使用，不可用于臨床醫(yī)療。
生物安全：豬瘟病毒和豬藍耳病病毒均為重要動物疫病病原，處理陽性樣本時需在生物安全二級（BSL-2）實驗室進行，穿戴防護裝備，防止感染。
防污染：PCR實驗極易受污染，必須嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯的槍頭，防止擴增產(chǎn)物污染導(dǎo)致假陽性。
方法優(yōu)勢
相較于傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)法（耗時長、生物安全要求極高）或血清學檢測（窗口期長），熒光PCR法具有顯著優(yōu)勢：
高特異性： 通過針對鼠疫桿菌特異性基因（如caf1、pla）設(shè)計的引物和探針，能夠精準識別目標菌，有效區(qū)分近緣菌種（如假結(jié)核耶爾森氏菌），避免假陽性。
高靈敏度： 檢測靈敏度極高（部分產(chǎn)品最低檢測限可達1-10 CFU/mL或10-100拷貝/毫升），有助于在感染早期、菌血癥含量較低或樣本經(jīng)過抗生素治療后做出準確判斷。
快速高效： 從樣本DNA提取到出結(jié)果通常在數(shù)小時內(nèi)完成，遠快于傳統(tǒng)培養(yǎng)法（通常需要數(shù)天），適合在突發(fā)公共衛(wèi)生事件中對大量樣本進行快速篩查。
安全便捷： 采用閉管檢測模式，擴增后無需開蓋處理，大大降低了擴增產(chǎn)物污染和操作人員接觸高致病性病原體的風險。部分試劑盒采用預(yù)混凍干技術(shù)，便于試劑的儲存和運輸。
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質(zhì)量控制與常見問題：
污染防控：
分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯吸頭。
實驗后用10%次氯酸或紫外燈清潔工作臺。
假陰性處理：
檢查樣本抑制物（如使用內(nèi)標基因）。
試劑保存：
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
關(guān)鍵字： 豬瘟/高致病性豬藍耳病病毒 ; CSFV/PRRSV-M ;雙重熒光 PCR 法;核酸檢測試劑盒;
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